产品名称： Hieff™ Taq DNA Polymerase常规DNA聚合酶

产品描述

Hieff^TM Taq DNA Polymerase是嗜热性Thermus aquaticus表达的热稳定重组型DNA聚合酶，分子量为94KD。该产品不含核酸内切酶、核酸外切酶以及**DNA，具有5’→3’聚合酶活性和5’→3’外切酶活性，但无3’→5’外切酶活性。扩增产物具有3′-dA，可直接用于TA克隆。

当模板GC含量＞60%且优化条件也无法正常扩增时，推荐使用我们的PCR Enhancer（Cat No. 10117ES03），可有助于扩增高GC含量模板。

产品组分

 Hieff™ Taq DNA Polymerase常规DNA聚合酶活性定义

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃ 30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存。

 Hieff™ Taq DNA Polymerase常规DNA聚合酶应用实例

1.       反应体系配制：

注：a, 对于大多数PCR反应，Mg²⁺*佳浓度为1.5-2 mM，即50μl反应体系中加入3-4 μl 25mM MgCl₂，如有需要，可以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索Mg²⁺*佳使用浓度。

b, dNTP Mix (10 mM each)（Cat No. 10124ES76，规格500μl；Cat No. 10124ES80，规格1ml）。

c, 推荐仅当模板GC含量＞60%且优化条件也无法正常扩增时使用，可能会降低保真度。

d, 不同模板*佳反应浓度有所不同，下表为50 μl反应体系推荐模板使用量：

2.       PCR反应条件设置：

核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

核酸内切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，加入2U本品，以ddH₂O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。

功能检测：PCR体系中加入1.25U本品，以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的360 bp条带。