RNA提取注意事项
1、组织样本要尽可能的新鲜,避免反复冻融。
2、提取时组织要充分研磨,组织量不宜过少,更不宜过多。
3、加入裂解液后应给予充分的孵育时间,使样本充分裂解。
4、在用Trizol法提取时,分层后吸取上清的原则是“宁愿少吸,不能多吸”,千万不能提取到中间层,否则会导致严重的基因组DNA污染。
5、洗涤时洗涤液应充分浸润到管壁的四周,确保洗涤彻底。
6、柱式提取法,洗涤完后除了对柱子进行空离后,还应当将吸附柱置于超净台内吹风5~10 min,使有机溶剂充分挥发干。
7、柱式法*后洗脱时候,当加入DEPC水后还应孵育3~5 min,或者提前将DEPC水加热至60℃,可提高洗脱得率。传统的Trizol裂解异丙醇沉淀法*后RNA是用DEPC水溶解沉淀,则应当给予适当溶解时间,并用枪头不断吹吸离心管底部。