有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异 性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig ( s )抗体、交叉反应物质和其它物质等。
1、类风湿因子
人血清中IgM、IgG型类风湿因子（RF）可以与ELISA系统中的捕捉抗体及酶标记二抗的FC段直接结合，从而导致假阳性。解决该情况的办法是：①用F(ab)2替代完整的IgG；②标本用联有热变性（63℃，10 min）IgG的固相吸附剂处理（将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效）；③检测抗原时，可以用2-巯基乙醇等加入到标本 稀释液中，使RF降解。
2、补体
ELISA系统中固相一抗和标记二抗过程中，抗体分子发生变构，其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来，使C1q 可以将二者连接起来，从而造成假阳性。解决的办法是：①用EDTA稀释标本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加热血清使C1q灭活。
3、嗜异性抗体
人类血清中含有能与啮齿类动物（如鼠等）Ig ( s ) 结合的天然嗜异性抗体，可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来，也能造成假阳性。解决的办法是：可在标本稀释液中加入过量的动 物Ig ( s ) ，但加入量不足或亚类不同时无效。
4、嗜靶抗原的自身抗体
抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体，有时能与靶抗原结合形成复合物，在ELISA方法中均可干扰抗原抗体测定结果。为避免以上情况出现，解决的办法是：测定前需用理化方法将其解离后再测定。
5、临床开展的用鼠源性CD3等单克隆抗体zhi疗，用放射性同位素标记鼠源性抗体的影像诊断及靶向zhi 疗等新技术，均有可能使这些病人体 内产生抗鼠抗体；另外，被鼠等啮齿类动物咬伤的病人体内也可以产生抗鼠Ig ( s )抗体。这些病人ELISA测定时均可产生假阳性。解决的办法是：测定抗原时，在标本中加入足量的正常鼠Ig ( s ) ，从而克服由于上述原因造成的假阳性。
6、交叉反应物质
类地高辛、类AFP样物质等，是与靶抗原有交叉反应的物质。在用多抗测定抗原时对测定结果影响不大，但在用单克隆抗体测定抗原时 ，假如交叉抗原决定簇正好是所用单克隆抗体相对应的靶决定簇时，也会出现假阳性结果。
7、标本中其它成分的影响
血清脂质过高、胆红素、血红蛋白及粘度过大等，均对ELISA测定结果有干扰作用。