PCR反应基本步骤:
变性:根据DNA高温变性的原理,将反应体系温度升至变性温度(高于模板熔点,约95℃),使目的DNA双链裂解成PCR模板(单链)。[95℃,30s]
退火:将反应体系温度骤降至退火温度(低于引物熔点约55℃),是PCR引物与PCR模板3’端杂交,称为退火。[55~65℃,30s]
延伸:将反应体系温度升至延伸温度(约72℃),DNA聚合酶按照碱基配对原则在引物3’端以5’→3’方向催化合成PCR模板新的互补链,使目的DNA拷贝数增加1倍。[72℃,30~60s]