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羟脯氨酸(HYP)试剂盒测定HYP含量计算公式​​​介绍

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

羟脯氨酸HydroxyprolineHYP是机体胶原蛋白主要成分之一,胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等,因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。

测定原理:

样品经水解产生游离的HYP,进一步被氯胺T氧化,氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应,产生红色化合物,在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值,可计算HYP含量。

羟脯氨酸含量计算公式:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y=64.875x+ 0.0251,R2=0.9991

(1)按样品重量计算

组织羟脯氨酸含量(mg/g 鲜重)=(ΔA-0.0251)÷64.875×V反总÷(V样÷V样总×W)

                       = 0.154×(ΔA-0.0251)÷W

(2)按xi 菌或细胞密度计算

细胞羟脯氨酸含量(mg/104 cell)=(ΔA-0.0251)÷64.875×V反总÷V样×V样总÷细胞数量(万个)= 0.077×(ΔA-0.0251)÷ 细胞数量(万个)

(3)按血清体积计算

HYP含量(mg/mL)=(ΔA-0.0251)÷ 64.875×V反总÷V样×2

                =0.154×(ΔA-0.0251)

V反总:反应总体积,0.3 mL;V样:反应中样品体积,0.06mL;V样总:加入提取液体积, mL;W:样本重量,g

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y=32.4375x+ 0.0251,R2=0.9991

(1)按样品重量计算

HYP含量(mg/g 鲜重)=(ΔA-0.0251)÷32.4375×V反总÷(V样÷V样总×W)

               = 0.308×(ΔA-0.0251)÷W

(2)按xi 菌或细胞密度计算

HYP含量(mg/104 cell)=(ΔA-0.0251)÷32.4375×V反总÷V样×V样总÷细胞数量(万个)= 0.154×(ΔA-0.0251)÷细胞数量(万个)

(3)按血清体积计算

HYP含量(mg/mL)=(ΔA-0.0251)÷32.4375×V反总÷V样×2

                = 0.308×(ΔA-0.0251)

V反总:反应总体积,0.3 mL;V样:反应中样品体积,0.06mL;V样总:加入提取液体积, mL;W:样本重量,g;2,血清吹干后复溶的倍数。

注意事项:

1、吸光值大于0.8,样品适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数。

2、试剂有一定的毒性,请操作时做好防护措施,防止吸入或与皮肤接触。

3、zui 低检出限为3.8mg/L。