细胞冻存是指将细胞放在低温环境，以达到减少细胞代谢的作用，从而达到对细胞进行长期储存进行保种的目的，以供后续实验或临床使用。细胞冻存一般采用慢冻原则，慢冻可使细胞逐步脱水，细胞不会因为产生大的冰晶而收到损害。
原理：
当温度低至-70℃时，细胞内的代谢活动及酶活性几乎全部停止，低于-130℃时，细胞能达到佳存活率。液氮可实现细胞的长期保存。
冷冻保护剂二甲基亚砜（DMSO）能快速穿透细胞膜进入细胞，降低冰点，延缓冻存过程，同时增加细胞膜的通透性，提高细胞内离子浓度，减少细胞内冰晶的形成，从而达到保护细胞的目的。
贴壁细胞冻存操作步骤：
1、预热冻存液；
2、用PBS冲洗细胞，加入胰酶消化（此步骤同细胞传代操作）；
3、终止消化后，重悬细胞，转移至无菌EP管，1000rpm离心5min；
4、弃上清，加入预热的细胞冻存液，细胞冻存佳密度为5×10^6~1×10^7/ml，一般不低于5×10^5/ml；
5、分装完毕后，拧紧冻存管盖并做好标记；
6、将分装好的冻存管转入程序降温盒，放入-80℃冰箱过夜；
7、将冻存管转移至液氮长期保存。
悬浮细胞冻存操作步骤：
1、用移液管将细胞悬液吹吸均匀，将细胞悬液移入离心管；
2、1000rpm离心 3 min，收集细胞沉淀；
3、用预热的冻存液重悬细胞，细胞冻存佳密度为3-5×10^6/ml，一般不低于5×10^5/ml；
4、分装完毕后，拧紧冻存管盖并做好标记；
5、将分装好的冻存管转入程序降温盒，放入-80℃冰箱过夜；
6、将冻存管转移至液氮长期保存。