Western Blot（WB）又称蛋白质免 疫印迹法，是基于蛋白质SDS-PAGE电泳分离和特异性抗体识别蛋白的特性，通过显色技术检测目的蛋白的技术。
蛋白质免 疫印迹法（WB）转膜流程： 小心撬开电泳凝胶板，裁取整块分离胶并放入预冷的湿转缓冲液，选取大小适当的NC膜，按“三明治”的形式从上到下依次摆放2层海绵、2张滤纸、分离胶、NC膜（或PVDF膜）、2张滤纸、2层海绵，组装湿转系统，灌满预冷1× 湿转缓冲液，没过“三明治”，室温100 V湿转60 min； tips：
1、湿转液需提前预冷，笔者习惯电泳开始时将湿转液置入制冰器或者-20℃冰箱；
2、转模时好整块分离胶转膜，以免裁胶时丢失部分蛋白；
3、做“三明治”的基本原则是“黑胶白膜”，即分离胶贴近湿转夹黑色面、NC膜贴近湿转夹白色面（或红色面）；
4、在制备“三明治”时，笔者习惯膜在下方、胶在上方，如此蛋白条带顺序和SDS-PAGE正面时的上样顺序完全一致，方便记忆；
5、湿转液好是现配现用，但也可重复使用，pubmed有团队证实湿转液可重复使用5次，而不明显影响实验结果；
6、湿转时，好在冰箱/冷室（cold room）或者置于冰盒中，在电泳时间小于1h时，笔者习惯预冷湿转液、室温转膜；
7、湿转条件亦有选择恒流的，比如200mA，2h等，笔者所使用的湿转条件对分子量为15-140kd的蛋白均适用；
8、PVDF膜需用甲醇预激（数秒钟即可），使得PVDF带正电，能更好地与带负电的蛋白结合，而NC膜无需预处理;i、制作“三明治”时注意排除SDS-PAGE胶与NC膜之间的气泡。