荧光定量 PCR 的主要用途之一即是相对定量,而提到相对定量,必然离不开内参。内参基因即是分子实验中用于内部参照的基因,它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差,保证实验结果的准确性。
理想的内参基因应该满足以下条件:
1、不存在假基因(Pseudogene),以避免基因组DNA的污染扩增;
2、高度或中度表达,排除低表达基因;
3、稳定表达于各组织和细胞中;
4、表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关;
5、其稳定的表达水平与目标基因相近;
6、不受任何内源性或外源性因素的影响,如不受任何实验处理方法的影响。