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贴壁细胞传代过程

贴壁细胞传代:
1：对于贴壁细胞来说，它需要把上清去掉，用1-2ML的PBS洗一下细胞，然后用枪吸去洗涤液，然后加入胰酶进行细胞消化。（加入1-2ML的PBS，我是会贴壁加入到培养皿的边缘，不能直接对着细胞加入PBS，容易把细胞都吹起来。这一步的目的是为了去掉残余的培养基的，残余的培养基会含有血清和一些离子等，不利于接下来的消化。此外，常见的是0.25%的胰酶。一般根据细胞皿的大小加入胰酶，对于10cm的dish，我会加入1ml的胰酶。）
2：放到37摄氏度培养箱30s-1min（我这里处理的是293T细胞，不同的细胞的消化时间是不一样的，需要具体的去查一查，如果消化的好的细胞是会呈现流沙状态的，上下晃动都会随着移动的。）
3：加入含有血清的培养液终止消化，用枪把培养液吹匀。（因为含有血清可以终止胰酶的消化反应，用枪吹培养皿底是为了把残留在底部的细胞吹起来）
4：转移到15ml的离心管中，离心，200g 5-10min(一般我是1000rpm离心3min)
5：去掉上清液，然后用PBS 重悬细胞，加入的PBS的量是10ML。再次离心，去掉上清。
6：加入适量的培养基，把细胞重悬，然后转移到培养皿里面。放入到37摄氏度的5%的二氧化碳培养箱。

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