细胞的传代培养
细胞传代：细胞在培养过程中不断增殖，培养皿/瓶空间有限，当细胞接触过密，生长就会受到抑制，影响细胞状态，因此我们要把其中一部分细胞分到别的培养皿/瓶里。
常见问题解答：
Q：为什么我们总说选择对数期细胞传代?
A：如下图：细胞的生长和分裂，一般遵循以下模式：停滞期，对数期(指数期)，平稳期(平台期)和衰退期。为了确保活力，遗传稳定性和表型稳定，必须使细胞保持在对数期。
Q：那如何确定细胞对数期?
A：根据上述细胞生长曲线，为了确保活力，必须使细胞保持在对数期就传代，所以一定不能等到细胞长满100%融合时才去消化传代。一般细胞长到 70% -80%左右即可传代。
Q：一般细胞传代都是1分2吗?
A：要根据不同细胞而定，如有的生长很快，比如说4T1细胞，传代取离心悬液的十分之一就已经足够了。有的又特别慢，比如 BT474。此时我们就要多观察摸索*合适的传代比例。
Q：消化很关键吗?
A：不得不说，细胞状态差，很多时候与传代时胰酶消化密切相关。一般肿瘤细胞消化1-2min即可。但是每一种细胞贴壁能力不同，因此对胰酶的反应也不同，我们需要密切跟踪。一般肉眼观察到贴壁细胞层能移动即可终止;而非细胞全部分散成单个。如下图分别是正确和错误的消化时间：
Q：部分比较难消化的细胞怎么办?
A：可放于37℃培养箱消化。以MDA-MB-231/PAX紫杉醇耐受细胞为例，放于37℃培养箱消化5-8min，轻轻拍打，才见细胞成片移动，因此针对难消化细胞一定要在显微镜下密切观察。
Q：几天换培养基?
A：正常情况下，培养液偏红色。如果细胞维持在pH6.5～6.6条件下，培养基变黄，说明培养液中代谢产物已堆积到一定量，细胞会脱落死亡，需要更换新鲜培养液。一般细胞生长旺盛时1～2天换一次，生长缓慢时，3～4天亦可。针对复苏后的细胞，建议隔天换液。
Q：每天观察细胞有必要吗?
A：一般的肿瘤细胞我们是隔天传代，但是切不可忽略对细胞的观察，一定要每天都要去看一下细胞，肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。记住，是每天。
Q：如果细胞形态不清晰或有异物等，如何处理?
A：可以考虑如下操作：首先，倒掉旧的培养基，用新的培养基或者PBS洗涤2-3次，再开始正式的消化、吹打。其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内。后续再密切观察。
Q：细胞污染怎么办?
A：如发现细胞有污染，一般建议丢弃。如果细胞非常宝贵，可试着加入含抗生su的培养基反复清洗，并用抗生su含量高的培养基培养，并经常更换培养基;