哪些是qPCR探针设计的一般原则:
1、扩增片段的长度不应太大,一般小于300bp。
2、探针不能和任一引物互补,且其长度在保证特异性的前提下尽可能的短,长度不要超过30bp。
3、探针的Tm值至少比引物的Tm值高5度
4、探针如用于检测多态位点,多态位点应尽可能靠近探针中部
5、探针5’端不能是碱基G,G对荧光基团有猝灭作用。