细胞划痕实验步骤:
1、先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀的划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。
2、 在孔中加入约5×105个细胞,培养细胞至汇合度达到90%以上。
3、用头比着直尺,垂直于背后的横线划痕。
4、 PBS洗细胞3次,去除划下的细胞,加入无血清培养基。
5、 放入37℃ 5% CO2培养箱培养。按0,12,24,48h时间点取样,100倍镜下拍照。如果细胞迁移(修复)能力较强,需相应缩短观察时间间隔。
6、 结果分析:对不同时间点不同处理分组的划痕间距进行分析。