犬血支原体PCR检测试剂盒反应的特异性決定因素为:
1.引物与模板DNA特异正确的结合。
2.碱基配对原则。
3. Tag DNA聚合酶合成反应的忠实性。
4.靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及 Tag DNA聚合醇耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大増加加,被扩増的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式増加的,能将皮克(pg=10-129)量级的起始待測模板扩増到微克(ug=10-69)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在xi 菌学中zu小检出率为3个xi菌。
(3)简便、快速
PCR反应用耐高温的 Tag DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩増液和水浴锅上进行变性退火-延伸反应,一般在2-4小时完成扩増反应。扩増产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4)对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或xi菌及培养细胞,DNA粗制品及总RNA均可作为扩増模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
注意事项：
1、使用本试剂前请仔细阅读本说明书全文。
2 、操作时应尽量少说话，因口腔中也含有支原体，可能引起样品污染，而造成假阳性；整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增应分区域进行，以避免交叉污染。
3 、实验时，试剂盒组分中的试剂使用前应充分融化并混匀（混匀时禁止激烈振荡，只需要进行上下倒置多次进行混匀）。
4、 反应管中加好所有的试剂后，应尽快上PCR仪进行扩增，以免形成过多的二聚体。
5、细胞培养物中含有青霉素和链霉素等抗生物素不会影响本品的检测结果。如果用户需要进一步提高检测。