蛋白质盐析与透析实验步骤

1.透析袋的预处理
为防干裂，新透析袋出厂时常用10%甘油进行处理，并含少量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质，需除去。将透析袋剪成100～120mm的小段，用50%乙醇煮沸1h，再依次用50%乙醇、0.01mol/L碳酸氢钠和0.001mol/LEDTA溶液洗涤，后用蒸馏水冲洗3～5次(新透析袋如不作上述特殊处理，也可用沸水煮5～10min，再用蒸馏水洗净即可使用)。透析袋一端用橡皮筋或线绳扎紧，也可用特殊的透析袋夹夹紧，从另一端灌满水，用手指稍加压，检查是否有渗漏，没有渗漏后方可使用。处理好的透析袋保存于蒸馏水中待用。

2.蛋白质盐析
取10%鸡蛋清溶液5mL于试管中，加入等量饱和硫酸铵溶液，微微摇动试管，使溶液混合后静置数分钟，蛋清蛋白质即可析出。如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵溶液，观察蛋白质的析出。取少量沉淀的蛋白质，加水稀释，观察沉淀是否会再次溶解。

3.蛋白质的透析
注入含鸡蛋清的氯化钠蛋白质溶液5mL于透析袋中，将袋的开口端用线扎紧，并悬挂在盛有蒸馏水的烧杯中，开口端位于液面之上。10min后，自烧杯中取出1mL溶液于试管中，加1%硝酸银溶液一滴，如有白色氯化银沉淀**，则证明蒸馏水中有Cl-存在。再自烧杯中取出1mL溶液置于另一试管中，加入1mL10%氢氧化钠溶液，然后滴加1～2滴1%硫酸铜溶液，观察有无蓝紫色出现。每隔20min更换蒸馏水一次，数小时后可观察到透析袋内出现轻微混浊，此为蛋白质沉淀。继续透析至蒸馏水中不再**氯化银沉淀为止。实验记录透析完成所需的时间。

注意事项:
蛋白质溶液用透析除盐时，正负离子透过半透膜的速度不相同，如(NH4)2SO4中的透析速度快，而透析过程中膜内的会**H2SO4，使膜内蛋白质溶液呈酸性。因此，为避免蛋白质变性，用盐析法纯化蛋白质时，开始时应用0.1mol/L的NH4OH透析。此外，为了保证蛋白质在透析过程中不发生变性，可以将透析过程置于低温下进行。