使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: PCR试剂盒
规格: 50T
公司产品仅用于科研分类:
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
尖孢镰孢核转录因子25抗体Anti-IL33 Antibody羧肽酶A4(CPA4)ELISA试剂盒
蝙蝠蛾拟青霉微管相关蛋白抗体Anti-IL33 Antibody羧肽酶A3(CPA3)ELISA试剂盒
泡盛曲霉酪氨酸激酶A/B/C抗体Anti-IL34 Antibody羧酸酯酶5A(CES5A)ELISA试剂盒
酿酒酵母新型抑癌基因抗体Anti-IL36A Antibody羧酸酯酶4A(CES4A)ELISA试剂盒
酿酒酵母转铁蛋白/血清铁传递蛋白抗体Anti-IL36A Antibody羧酸酯酶3(CES3)ELISA试剂盒
大肠埃希氏菌肿瘤坏死因子配体超家族成员4抗体Anti-IL3RA Antibody羧酸酯酶2(CES2)ELISA试剂盒
混料芽孢杆菌肿瘤坏死因子配体超家族成员14抗体Anti-IL4 Antibody羧酸酯酶1(CES1)ELISA试剂盒
麦根腐平脐蠕孢肿瘤坏死因子配体超家族成员18抗体Anti-IL3RA Antibody羧基端结合蛋白2(CTBP2)ELISA试剂盒
黑木耳肿瘤坏死因子受体超家族成员14抗体Anti-IL4 Antibody髓样前体抑制因子2(MPIF2)ELISA试剂盒
细孢毛霉磷酸化血管**素受体2抗体Anti-IL4 Antibody髓样前体抑制因子1(MPIF1)ELISA试剂盒
球孢白僵菌转化生长因子β活化激酶1Anti-IL4 Antibody髓核分化抗原(MNDA)ELISA试剂盒
木贼镰孢菌磷酸化转化生长因子β活化激酶1Anti-IL4 Antibody髓触发受体2(TREM2)ELISA试剂盒
仙人掌有孢汉逊酵母磷酸化转化生长因子β活化激酶1Anti-IL4R Antibody髓触发受体1(TREM1)ELISA试剂盒
蔷薇生链格孢磷酸化转化生长因子β活化激酶1Anti-IL4R Antibody髓触发受体1(IREM1)ELISA试剂盒
异常毕赤酵母磷酸化血管**素受体2抗体Anti-IL4R Antibody髓鞘型脂肪酸结合蛋白(FABP8)ELISA试剂盒
大丽轮枝孢磷酸化色氨酸羟化酶抗体Anti-IL4R Antibody髓鞘少突胶质糖蛋白(MOG)ELISA试剂盒
PCR试剂盒人转胶蛋白(TAGLN)酶附测定试剂盒Human HECTD2 ELISA Kit溴脱氧尿苷抗体
人端粒酶相关蛋白1(TEP1)酶测定试剂盒Human HECTD3 ELISA Kit肿瘤/抗原2.2抗体
人碱性唾液脯氨酸丰富蛋白2(PRB2)附测定试剂盒 Human HELB ELISA Kit肿瘤/抗原2.3抗体
人超氧化物歧化酶1(SOD1)酶测定试剂盒Human HDAC5 ELISA Kit肿瘤/抗原2.4抗体
人成骨生长肽/成骨多肽(OGP)酶附测定试剂盒 Human HDAC4(Histone deacetylase 4) ELISA Kit脑钠素/利钠肽抗体
人成熟促进因子(MPF)酶测定试剂盒 Human HDAC6 ELISA KitB Raf抗体
人成纤维生长因子23(FGF23)酶联定试剂盒Human HAUS3 ELISA Kit癌易感基因1抗体
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
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