PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: PCR定量试剂盒
规格: 50T
公司产品仅用于科研分类:
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
硫磺菌(硫色多孔菌)TRAF2和NCK激酶相互作用蛋白抗体Anti-IL5RA Antibody髓鞘碱性蛋白(MBP)ELISA试剂盒
瓶霉属磷酸化TRAF2和NCK激酶相互作用蛋白抗体Anti-IL6 Antibody髓鞘关联糖蛋白(MAG)ELISA试剂盒
马德里毛壳磷酸化TRAF2和NCK激酶相互作用蛋白抗体Anti-IL6 Antibody髓分化因子88(MyD88)ELISA试剂盒
大肠埃希氏菌(大肠杆菌)磷酸化结节性硬化症蛋白1抗体Anti-IL6 Antibody酸性葡萄糖苷酶β(GβA)ELISA试剂盒
柿盘多毛孢磷酸化色氨酸羟化酶抗体Anti-IL6 Antibody酸性葡糖苷酶α(GαA)ELISA试剂盒
毛耳白背组织型纤溶酶原激活剂抗体Anti-IL6 Antibody酸性磷酸酶1(ACP1)ELISA试剂盒
沼泽红假单胞菌转化生长因子β调节蛋白1抗体Anti-IL6 Antibody酸性几丁质酶(CHIA)ELISA试剂盒
弓形虫(GT0株)磷酸化微管相关蛋白抗体Anti-IL6 Antibody速激肽受体3(TACR3)ELISA试剂盒
微白黄链霉菌Toll样受体6抗体Anti-IL6R Antibody速激肽受体2(TACR2)ELISA试剂盒
细链格孢Toll样受体9抗体Anti-IL7 Antibody速激肽受体1(TACR1)ELISA试剂盒
米根霉髓系触发受体2抗体Anti-IL7 Antibody速激肽4(TAC4)ELISA试剂盒
三棱孢小囊菌髓系触发受体样转录因子1抗体Anti-IL7 Antibody速激肽1(TAC1)ELISA试剂盒
沙福芽孢杆菌髓系触发受体样转录因子2抗体Anti-IL7 Antibody苏氨酰tRNA合成酶(TARS)ELISA试剂盒
粘质皮状新丝孢酵母甲状腺过氧化物酶抗体Anti-IL7 Antibody松果腺蛋白(PNN)ELISA试剂盒
荧光假单胞菌血小板**素/巨核集落激因子抗体Anti-ILK Antibody松弛肽3(RLN3)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌瞬时受体电位通道1抗体Anti-IL7 Antibody松弛肽2(RLN2)ELISA试剂盒
PCR定量试剂盒人成纤维生长因子9(FGF9)酶吸附测定试剂盒Human HAX1 ELISA Kit癌易感基因2抗体
人成纤维生长因子结合蛋白1(FGFBP1)酶联吸附测定试剂盒Human GYS1 ELISA Kit溴脱氧尿苷抗体
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人成纤维生长因子受体底物2(FRS2)酶吸附测定试剂盒Human H3F3B ELISA Kit骨形态发生蛋白2抗体
人成纤维生长因子受体底物3(FRS3)酶联附测定试剂盒Human HABP2 ELISA Kit骨形态发生蛋白7抗体
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人穿孔蛋白1/成孔蛋白(PRF1/PFP)酶联附测定试剂盒Human HBQ1 ELISA Kitβ-连环蛋白/β-连环素/β链接素抗体
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