Victoria/Yamagata系/乙型流感病毒检测试剂盒

操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
通用型沙门氏菌（Salmonellae）基因检测试剂盒20次索氏梭状芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

通用型鼠伤寒沙门菌Salmonella typhimurium基因检测试剂盒20次库蚊通用探针法荧光定量PCR试剂盒

通用型空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）基因检测试剂盒20次节片代凡绦虫探针法荧光定量PCR试剂盒

通用型大肠弯曲杆菌（Campylobacter coli）基因检测试剂盒20次毛细线虫通用探针法荧光定量PCR试剂盒

通用型海鸟弯曲杆菌（Campylobacter laridis）基因检测试剂盒20次山羊疱疹病通用探针法荧光定量PCR试剂盒

通用型产气荚膜梭茵（Clostridium perfringens）基因检测试剂盒20次头孢霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒

通用型艰难梭菌（Clostridium difficile）基因检测试剂盒20次节状古柏线虫探针法荧光定量PCR试剂盒

通用型艾里塔拉军团菌（Legionella erythra）基因检测试剂盒20次白喉棒杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

通用型嗜肺军团菌（Legionella pneumophilia）基因检测试剂盒20次倍赞氏金蝇探针法荧光定量PCR试剂盒

通用型大肠杆菌（Escherichia coli）基因检测试剂盒20次肉梭状芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

通用型vero大肠杆菌志贺氏-1（VTEC - Shigatoxin 1）20次溶血梭状芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

基因检测试剂盒贝氏隐孢子虫探针法荧光定量PCR试剂盒

通用型vero大肠杆菌志贺氏-2（VTEC - Shigatoxin 2）基因检测试剂盒20次蛇形隐孢子虫探针法荧光定量PCR试剂盒

通用型诺瓦克病毒Norovirus基因检测试剂盒20次牛棒杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

通用型幽门螺杆菌Helicobacter pylori基因检测试剂盒20次激隐核虫探针法荧光定量PCR试剂盒
Victoria/Yamagata系/乙型流感病毒检测试剂盒Dysferlin/FITC  荧光素标记Dysferlin蛋白抗体IgG甘草次酸（α型） 分析标准品，>98%

EPEC/E.coli /Biotin   生物素化兔抗肠致病性大肠杆菌抗体IgG草铵膦 分析标准品

E.coli/Biotin   生物素化兔抗普通大肠埃希菌菌体蛋白抗体IgG增甘膦 分析标准品

E2F1/FITC  荧光素标记转录因子E2F-1抗体IgG超纯反相C-18层析填料 40-63µm ,60Å,Bet:500m2/g

E2F2/FITC  荧光素标记转录因子E2F-2抗体IgG高纯度硅胶II 60-200µm ,60Å,Bet:500m2/g

E2F3/FITC  荧光素标记转录因子E2F-3抗体IgG高纯度硅胶III 120-200µm ,60Å,Bet:500m2/g

E2F4/FITC  荧光素标记转录因子E2F-4抗体IgG正己酸 分析标准品

E2F5/FITC  荧光素标记转录因子E2F-5抗体IgG六氯苯 分析标准品

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