禽流感病毒N8亚型(AIV-N8)检测试剂盒(荧光-PCR法)

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
BrdU标记法细胞繁殖荧光定量检测试剂盒10/50 次E.G7-OVA(小鼠T瘤)人纤维介素蛋白（fgl2）ELISA试剂盒,

BrdU标记法载玻片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒10/20次EB-3(人Burkitt瘤)小鼠β-防御素（β-DF）ELISA试剂盒,

BrdU标记法组织冰冻切片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒10/20次EBTr (NBL-4) (牛胚气管)小鼠骨退化特异标志物（CTX-2）ELISA试剂盒,

BrdU标记法组织石蜡切片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒10/20次FO(小鼠骨髓瘤)小鼠促肾上腺皮质（ACTH）ELISA试剂盒,

BrdU标记法载玻片细胞繁殖NBT显色检测试剂盒10/20次G1(发绿色荧光的小鼠胚胎干)大鼠胞浆型磷脂酶A2（cPLA2）ELISA试剂盒,

BrdU标记法组织冰冻切片细胞繁殖NBT显色检测试剂盒10/20次G-401(人肾癌Wilms)大鼠视黄醇结合蛋白（RBP）ELISA试剂盒,

BrdU标记法组织石蜡切片细胞繁殖NBT显色检测试剂盒10/20次GH3(大鼠垂体瘤)大鼠可溶性CD14（sCD14）ELISA试剂盒,

细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒100/250次FC33(人胚胎肾(Asp-2基因修饰))大鼠甲状腺素抗体（TAb）ELISA试剂盒,

全组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒10次H22(小鼠肝癌)大鼠甲状腺球蛋白（TG）ELISA试剂盒,

冰冻切片组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒50次H4-II-E-C3(大鼠肝癌 )大鼠性结合球蛋白（SHBG）ELISA试剂盒,

通用型组织/细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒10/100次HA(人羊膜)大鼠相关血浆蛋白A（PAPP-A）ELISA试剂盒,

细胞衰老特异性脂褐素靛酚原位染色试剂盒50次HAN(人羊膜)大鼠骨成型蛋白7（BMP-7）ELISA试剂盒,

（适合与红细胞分别；不适合人体心肌和小鼠脑组织）HB611(人肝癌)猪白介素17（IL-17）ELISA试剂盒,

全组织衰老特异性脂褐素靛酚原位染色试剂盒10次HBE(人支气管上皮样)绵羊白介素1（IL-1）ELISA试剂盒,

冰冻切片组织衰老特异性脂褐素靛酚原位染色试剂盒50次HCC38(人导管癌)兔子间粘附分子1（ICAM-1/CD54）ELISA试剂盒,
禽流感病毒N8亚型(AIV-N8)检测试剂盒(荧光-PCR法)TNF－ Beta  大鼠肿瘤坏死因子-β异铝 ≥98%

sTNF Alpha－RI(humen)  大鼠可溶性肿瘤坏死因子-受体1异铝  99.99% metals basis

sTNF Alpha－RII(humen)  大鼠可溶性肿瘤坏死因子-受体2仲丁铝 97%

TGF Beta 2  大鼠转化生长因子 β 2仲丁铝 95%

TGF Beta 1  大鼠转化生长因子 β 1氧化铝 99.99% metals basis,晶型α,0.20μm

EGF  大鼠表皮生长因子氧化铝 4N 晶型α,陶瓷级

EGFR  大鼠表皮生长因子受体纳米级氧化铝 99.99% metals basis,晶型γ,20nm

rat-VEGF/ELISA  大鼠血管内皮生长因子氧化铝 超细4N，晶型α，θ ,陶瓷级

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