禽流感病毒H6亚型(AIV-H6)检测试剂盒(荧光-PCR法)

操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
全组织衰老特异性晚期脂褐素铁还原法10次MCF 7B(人癌)大鼠血小板衍生生长因子BB（PDGF-BB）ELISA试剂盒,

（SCHMORL）染色试剂盒MDA-MB-157(人癌)大鼠磷酸肌醇3激酶（PI3K）ELISA试剂盒,

冰冻切片组织衰老特异性晚期脂褐素铁还原法50次MDA-MB-175VII(人导管癌)大鼠嗜酸粒趋化因子（ECF）ELISA试剂盒,

（SCHMORL）染色试剂盒MDA-MB-415(人癌)大鼠E钙黏蛋白/上皮钙黏蛋白（E-Cad）ELISA试剂盒,

石蜡切片组织衰老特异性晚期脂褐素铁还原法10次MDA-MB-436(人癌)大鼠血管紧张素原（aGT）ELISA试剂盒,

（SCHMORL）间接染色试剂盒MDA-MB-468-06(人癌)鸡17-酮类固醇（17-KS）ELISA试剂盒,

石蜡切片组织衰老特异性晚期脂褐素铁还原法50次MFC-GFP(小鼠前胃癌(绿色荧光蛋白标记))兔p53（p53）ELISA试剂盒,

（SCHMORL）直接染色试剂盒MPC-11(小鼠浆瘤)兔子瘦素（LEP）ELISA试剂盒,

细胞衰老特异性晚期脂褐素高碘酸希尔（PAS）法50次MS751(人颈表皮癌)兔子白血病抑制因子受体（LIFR）ELISA试剂盒,

品红亚硫酸盐（FUCHSIN SULFITE）原位染色试剂盒NCI-H157(人非小肺腺癌)胃癌标志物ELISA试剂盒--动物，人

全组织衰老特异性晚期脂褐素高碘酸希尔（PAS）法10次NCI-H1688(人典型小肺癌)MIO培养基

品红亚硫酸盐（FUCHSIN SULFITE）原位染色试剂盒NCI-H1703(人肺鳞癌)新生霉素使用前，每支加入100mlHB4153中

冰冻切片组织衰老晚期特异性脂褐素高碘酸希尔（PAS）法50次NCI-H205(人肾上腺腺瘤)CBZ-D-缬氨酸

品红亚硫酸盐（FUCHSIN SULFITE）原位染色试剂盒NCI-H2087(人非小肺腺癌)L-脯氨酸甲酯盐酸盐

石蜡切片组织衰老特异性晚期脂褐素高碘酸希尔（PAS）法10次NCI-H209(人小肺癌)Na-苯甲酰-L-精氨酰盐酸盐
禽流感病毒H6亚型(AIV-H6)检测试剂盒(荧光-PCR法)Ret MMP-9  大鼠血清金属基质蛋白酶-9硫酸奎宁 98%

RANTES  大鼠趋化因子硫酸奎宁 生物试剂级，99.0%，荧光分析

E2(Ret)  大鼠雌二蛇根碱 分析标准品，≥99.5%

G-CSF  大鼠粒-集落激因子利血平 ≥99.0% (HPLC)

GM-CSF  大鼠粒-巨噬集落激因子利血平 用于LC-MS，>99.9%(HPLC)

M-CSF  大鼠巨噬-集落激因子间甲苯甲酸 CP

LIF  大鼠白血病抑制因子间甲酸  99.0%

IGF-1  大鼠胰岛素样生长因子-13,5-二甲基吡啶 98%

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