口蹄疫病毒A型(FMDV-A)检测试剂盒(荧光-PCR法)

操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
饮料污染ATP生物发光法定量检测试剂盒50次人成纤维母-胎儿精氨酸葡萄糖斜面琼脂    用于霍乱弧菌的复合生化试验（SN标准）

水质污染ATP生物发光法定量检测试剂盒50次人成纤维母-新生改良Camp-BAP氏琼脂基础用于弯曲杆菌选择性分离培养（GB标准）

细胞趋化作用检测试剂专题人成纤维母-苯甲氧羰酰琥珀酰亚

名称规格人毛CBZ-D-亮氨酸

动物细胞趋化作用（chemotaxis）软琼脂检测试剂盒10次人基质人低氧诱导因子1α（HIF-1α）ELISA试剂盒,HIF-1α ELISA kit

盘基网柄菌（Dicyostelium）细胞趋化作用（chemotaxis）10次人外根鞘人甲状腺素（T4）ELISA试剂盒,T4 ELISA

软琼脂检测试剂盒人内根鞘人CCAAT增强子结合蛋白ε（C/EBPε）ELISA试剂盒,

细胞趋化作用（chemotaxis）软琼脂检测试剂盒10次人角质人钙联蛋白（CNX）ELISA试剂盒,

细胞粘附性检测试剂专题人内皮人球蛋白M（IgM）ELISA试剂盒,

名称规格人成纤维小鼠粒集落激因子（G-CSF）ELISA试剂盒,

通用型细胞粘附性（cell adhesion）比色法检测试剂盒50次人扁桃体上皮小鼠8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）ELISA试剂盒,

通用型细胞粘附性（cell adhesion）荧光检测试剂盒50次人口腔角质小鼠铜蓝蛋白（CP/CER）ELISA试剂盒,

血液凝集分子检测试剂专题人牙龈成纤维小鼠肌红蛋白（MYO/MB）ELISA试剂盒,

名称规格人牙周膜成纤维大鼠纤溶酶抗纤溶酶复合物（PAP）ELISA试剂盒,

通用型血液凝集分子纤维蛋白检测法（Fibrometer）分析试剂盒50次人食道平滑肌大鼠抗凝血酶受体（ATR）ELISA试剂盒,
口蹄疫病毒A型(FMDV-A)检测试剂盒(荧光-PCR法)TLR-9/CD289(Human Toll-like receptor 9) ELISA kit  人Toll样受体92,2-二甲基己烷 98%

TGF Beta2(Human transforming growth factors Beta2) ELISA Kit  人转化生长因子β2N,N-二甲基对苯二 98%

MCP-4/CCL13(Human monocyte chemotactic protein 4) ELISA kit  人单核趋化蛋白4二亚乙基三五乙酸���酐 98%

LTD4(Human leukotriene D4) ELISA Kit  人白三烯D41,12-二氨基十二烷 98%

N-Cad(Human Neural-Cadherin) ELISA kit  人N钙黏蛋白/神经钙黏蛋白1,7-二溴庚烷 98%

HB-EGF(Human heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor) ELISA Kit  人肝素结合性表皮生长因子间二氯苄 97%

ESF(Human erythropoiesis stimulating factor) ELISA Kit  人红激因子2,2'-二硫双(5-硝基吡啶) 97%

TRANCE(Human TNF related activation induced cytokine) ELISA Kit  人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子3,3'-二硫代二酸 99%

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