高致病性猪蓝耳病病毒(PRRSV-M)检测试剂盒(荧光-PCR法)

操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
活化蛋白C（APC）活性荧光定量检测试剂盒20次人肝内胆管上皮大鼠血红素氧合酶1（HO-1）ELISA试剂盒,

纤维蛋白溶酶（PLASMIN）活性比色法定量检测试剂盒20次人肝大鼠可溶性血小板内皮粘附分子1（sPECAM-1/sCD31）ELISA试剂盒,

纤维蛋白溶酶（PLASMIN）活性荧光定量检测试剂盒20次人肝星形大鼠粒集落激因子（G-CSF）ELISA试剂盒,

血液凝血酶（THROMBIN）活性比色法定量检测试剂盒20次人脾脏内皮大鼠骨成型蛋白受体1A（BMPR-1A）ELISA试剂盒,

细胞凝血酶（THROMBIN）活性比色法定量检测试剂盒20次人脾脏成纤维仓鼠甲状腺结合球蛋白（TBG）ELISA试剂盒,

组织凝血酶（THROMBIN）活性比色法定量检测试剂盒20次人心脏微血管内皮豚鼠纤溶酶抗纤溶酶复合物（PAP）ELISA试剂盒,

血液凝血酶（THROMBIN）活性荧光定量检测试剂盒20次人动脉内皮鸡单纯疱疹病Ⅱ型抗体（HSVⅡ-Ab）ELISA试剂盒,

细胞凝血酶（THROMBIN）活性荧光定量检测试剂盒20次人主动脉内皮鸡β内酰酶（β-lactamase）ELISA试剂盒,

组织凝血酶（THROMBIN）活性荧光定量检测试剂盒20次人主动脉平滑肌鸭白介素4（IL-4）ELISA试剂盒,

C1-ESTERASE人主动脉成纤维兔诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）ELISA试剂盒,

ACTIVATED PC人心肌兔子血小板活化因子（PAF）ELISA试剂盒,

LEUCOCYTE ELASTASE人心人抗白蛋白抗体（AAA）ELISA试剂盒--动物，人

PLASMIN STREPTOKINASE COMPLEX人心脏成纤维改良Skirrow氏琼脂基础    用于空肠弯曲菌的分离培养（SN 、GB标准）

PROTEIN S人心脏成心室Campy-Cefex 添加剂每支添加于200ml Campy-Cefex 琼脂基础中

PROTHROMBINASE INDUCED CLOTTING TIME；PiCT人心脏成纤维房3-氨基异丁酸
高致病性猪蓝耳病病毒(PRRSV-M)检测试剂盒(荧光-PCR法)CDl4(Human cluster Of differentiation) ELISA Kit  人CD14分子溴甲菲啶  95%

AIF(Human apoptosis inducing factor) ELISA Kit  人凋亡诱导因子2,3-二氯甲苯 98.0%

LCA/CD45(Human leukocyte common antigen) ELISA Kit  人白共同抗原二硫代甘酸 97%

CD4(Human cluster Of differentiation) ELISA Kit  人CD4分子2,2-二氟-1,3-二甲基-咪唑烷 97%

P-cad(Human Placenta Cadherin) ELISA Kit  人P钙黏蛋白/胎盘钙黏蛋白N,N-二甲基烯基 98%

KGF(Human Keratinocyte Growth Factor) ELISA Kit  人角化生长因子2-(2-乙基)二酸二乙酯 98%

PDGF-BB(Human Plaet-Derived Growth Factor-BB) ELISA kit  人血小板衍生生长因子BB1-乙基吡啶盐酸盐  98%

CXCL16(Human CXC-chemokine ligand 16) ELISA Kit  人CXC趋化因子配体16聚乙烯亚 M.W. 70,000, 50%水溶液

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