马疱疹病毒4型（EHV-IV）检测试剂盒（荧光-PCR法）

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品组成:

下列是公司正热销的产品：

细胞PAR-1蛋白表达荧光定量检测试剂盒10/50 次人牙周膜成纤维裂解物人白介素1可溶性受体Ⅰ（IL-1sRⅠ）ELISA试剂盒,

PAR-1蛋白表达西方杂交分析试剂盒5次人食道上皮裂解物人基质金属蛋白酶抑制因子4（TIMP-4）ELISA试剂盒,TIMP-4 ELISA kit

PAR-1蛋白共沉淀分析试剂盒5次人食道平滑肌裂解物人胆酸（CA）ELISA试剂盒, CA ELISA kit

PAR-1蛋白表达elisa试剂盒25次人肠微血管内皮裂解物人素相关蛋白A（CagA）ELISA试剂盒, CagA ELISA kit

细胞PAR-2蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒10/20次人肠平滑肌裂解物人胃泌素释放多肽（GRP）ELISA试剂盒, GRP ELISA kit

载玻片细胞PAR-2蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次人结肠平滑肌裂解物人前列环素（PGI）ELISA试剂盒, PGI ELISA

冰冻切片组织PAR-2蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次人肺微血管内皮裂解物人早老素2（PS-2）ELISA试剂盒, PS-2 ELISA

石蜡切片组织PAR-2蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次人肺动脉内皮裂解物人游离状腺原氨酸（Free-T3）ELISA试剂盒,Free-T3 ELISA

载玻片细胞PAR-2蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次人肺动脉平滑肌裂解物人绒毛膜促性腺（HCG）ELISA试剂盒,HCG ELISA

冰冻切片组织PAR-2蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次人肺动脉成纤维裂解物人总前列腺特异抗原（tPSA）ELISA试剂盒, tPSA ELISA

石蜡切片组织PAR-2蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次人肺泡上皮裂解物人αL艾杜糖苷酸酶（IDUA）ELISA试剂盒,

细胞PAR-2蛋白表达比色法定量检测试剂盒10/50 次人支气管上皮裂解物人1,3-βD葡葡糖苷酶（1,3-βD-Glu）ELISA试剂盒,

细胞PAR-2蛋白表达荧光定量检测试剂盒10/50 次人气管上皮裂解物人类似RIKEN cDNA 2610307008 基因 ELISA试剂盒,

PAR-2蛋白表达西方杂交分析试剂盒5次人小气道上皮裂解物人白球蛋白样受体亚家族B成员4（LILRB4）ELISA试剂盒,

PAR-2蛋白共沉淀分析试剂盒5次人肺成纤维裂解物人糖链抗原19-9（CA19-9）ELISA试剂盒,
马疱疹病毒4型（EHV-IV）检测试剂盒（荧光-PCR法）BJP(Human Bence-Jones protein) ELISA Kit  人本周蛋白聚乙二 average Mn 200

CEF(Human Carcinoembryonic Ferritin) ELISA Kit  人癌胚铁蛋白聚乙二 average Mn 1000

SCCAg(Human squamous cell carcinoma related antigen) ELISA Kit  人鳞状癌相关抗原聚乙二 average Mn 1500

TSA(Human tumor specific antigen) ELISA Kit  人肿瘤特异性抗原聚乙二 average Mn 2000

MMSAM(Human melanoma metastasis surface adhesion molecule) ELISA Kit  人黑色素瘤转移表面黏附分子聚乙二 average Mn 4000

BRCA-2(Human breast cancer susceptibility protein 2) ELISA Kit  人癌易感蛋白2聚乙二 average Mn 6000

ASK-1(Human apoptosis signal regulating kinase 1) ELISA Kit  人凋亡信号调节激酶I聚乙二 average Mn 800

BAX(Human Bcl-2 associated X protein) ELISA Kit  人Bcl-2相关X蛋白聚乙二 average Mn 600

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

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