马链球菌兽疫亚种（ SEZ）检测试剂盒（荧光-PCR法）

操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
石蜡切片组织MYC蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次人支气管上皮总RNADEAE葡聚糖凝胶A-50

载玻片细胞MYC蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次人气管上皮总RNA人胃肠癌标志物CA199ELISA试剂盒,

冰冻切片组织MYC蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次人小气道上皮总RNA人生长释放肽ghrelin（GHRP-Ghrelin）ELISA试剂盒, GHRP-Ghrel

石蜡切片组织MYC蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次人肺成纤维总RNA人糖皮质受体α（GR-α）ELISA试剂盒,GR-α ELISA

细胞MYC蛋白表达比色法定量检测试剂盒10/50 次人支气管平滑肌总RNA人鸟苷酸结合蛋白4（Gbp4）ELISA试剂盒,Gbp4 ELISA

细胞MYC蛋白表达荧光定量检测试剂盒10/50 次人气管平滑肌总RNA人1,3-二磷酸甘油酸（1,3-DPG）ELISA试剂盒,1,3-DPG ELISA

MYC蛋白表达西方杂交分析试剂盒5次人骨骼肌总RNA人D-乳酸脱氢酶（D-LDH） ELISA试剂盒, D-LDH  ELISA

MYC蛋白共沉淀分析试剂盒5次人骨骼肌卫星总RNA人血管**素受体/含球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶2（Tie-2）ELISA试剂盒,

MYC蛋白表达elisa试剂盒25次人骨骼肌成肌总RNA人维生素D（VD）ELISA试剂盒,

细胞TNF ALPHA蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒10/20次人肾小球内皮总RNA人硫酸肝素糖蛋白（HSPG）ELISA试剂盒,

载玻片细胞TNF ALPHA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次人肾近曲小管上皮总RNA人电子转移黄素蛋白β肽（ETFB）ELISA试剂盒,

冰冻切片组织TNF ALPHA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次人肾皮质上皮总RNA人巨噬激蛋白（MSP）ELISA试剂盒,

石蜡切片组织TNF ALPHA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次人肾上皮总RNA小鼠巨噬集落激因子（M-CSF）ELISA试剂盒,

载玻片细胞TNF ALPHA蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次人肾系膜总RNA小鼠L苯丙氨酸解氨酶（PAL）ELISA试剂盒,

冰冻切片组织TNF ALPHA蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次人膀胱平滑肌总RNA小鼠乳铁传递蛋白/乳铁蛋白（LF/LTF）ELISA试剂盒,
马链球菌兽疫亚种（ SEZ）检测试剂盒（荧光-PCR法）CCK(Human cholecystokinin) ELISA Kit  人胆囊收缩素/肠促胰酶肽藻类液体培养基 BR

P III NP(Human N-terminal procollagen III propeptide) ELISA Kit  人Ⅲ型前胶原肽藻类琼脂培养基 BR

Col II (Human Collagen Type II ) ELISA Kit  人Ⅱ型胶原检定培养基1号 BR

Col I (Human Collagen Type I ) ELISA Kit  人Ⅰ型胶原检定培养基2号（低 pH） BR

P I CP(Human procollagen III N-terminal peptide) ELISA Kit  人Ⅰ型前胶原羧基端肽检定培养基3号 BR

HA(Human Hyaluronic acid) ELISA Kit  人透明质酸检定培养基5号 BR

Col IV (Human Collagen Type IV ) ELISA KIT  人Ⅳ型胶原检定培养基7号 BR

Col III (Human Collagen Type III ) ELISA KIT  人Ⅲ型胶原检定培养基8号 BR

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