产品特点：
1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。
2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。
注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。
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产品名称
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异嗜性白血病病毒（X-MuLV）检测（荧光-PCR法）
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规格
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50T
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货号
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FS-01P99639
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操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
产品组成:
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成分
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规格
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溶液A
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13ml
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溶液B
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13ml
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溶液C
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18ml
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离心吸附柱
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50套
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通用洗柱液
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50ml
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DNA洗脱液
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10ml
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说明书
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1份
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下列是公司正热销的产品：
TRAIL 蛋白表达elisa试剂盒25次人羊膜上皮微小RNA人β葡糖苷酶（β-glucosidase）ELISA试剂盒,
细胞EGFR 蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒10/20次人滋养层绒毛微小RNA人基膜聚糖/内腔蛋白（LUM）ELISA试剂盒,
载玻片细胞EGFR 蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次人绒毛间叶成纤维微小RNA人维生素K1（VK1）ELISA试剂盒,
冰冻切片组织EGFR 蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次人前脂肪-内脏微小RNA人纤溶酶原激活剂（PLGA）ELISA试剂盒,
石蜡切片组织EGFR 蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次人前脂肪-皮下微小RNA人球蛋白样转录体受体（ILTsR/LIR/CD85）ELISA试剂盒,
载玻片细胞EGFR 蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次人间充质干-骨髓微小RNA大鼠解整合素样金属蛋白酶9（ADAM9）ELISA试剂盒,
冰冻切片组织EGFR 蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次人间充质干-脂肪微小RNA大鼠胃蛋白酶（PP）ELISA试剂盒,
石蜡切片组织EGFR 蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次人间充质干-肝脏微小RNA大鼠骨保护素配体（OPGL）ELISA试剂盒,
细胞EGFR 蛋白表达比色法定量检测试剂盒10/50 次人脐带间充质干微小RNA猪松弛肽/松弛素（RLN）ELISA试剂盒,
细胞EGFR 蛋白表达荧光定量检测试剂盒10/50 次人肺间充质干微小RNAB瘤因子3（Bcl3）ELISA试剂盒--动物，人
EGFR 蛋白表达西方杂交分析试剂盒5次人上皮微小RNA内皮抑素（ES）ELISA试剂盒--动物，人
EGFR 蛋白共沉淀分析试剂盒5次人成纤维微小RNA血管紧张素原（aGT）ELISA试剂盒--动物，人
EGFR 蛋白表达elisa试剂盒25次人脐静脉内皮微小RNA副溶血性弧菌增菌液
细胞IGF 蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒10/20次人脐动脉内皮微小RNADL-胱氨酸
载玻片细胞IGF 蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次人脐静脉平滑肌微小RNAL-赖氨酸甲酯盐酸盐
异嗜性白血病病毒（X-MuLV）检测（荧光-PCR法）LMA(Human liver cell membrane antibody) ELISA Kit 人抗肝膜抗体改良MC培养基 BR
LSP(Human liver specific lipoprotein) ELISA Kit 人抗肝特异性脂蛋白抗体甘露卵黄多粘菌素琼脂 BR
EMAb(Human eye muscle antibody) ELISA Kit 人抗眼肌抗体水解酪蛋白胨(MH)肉汤 BR
C1q(Human Complement 1q antibody) ELISA Kit 人抗补体1q抗体水解酪蛋白胨(MH)琼脂 BR
IFA(Human intrinsic factor antibody) ELISA Kit 人抗内因子抗体缓冲葡萄糖蛋白胨水培养基 BR
Apl/APA(Human phospholipid antibody) ELISA Kit 人抗磷脂抗体麦芽汁培养基 BR
AHA(Human Histone antibody) ELISA Kit 人抗组蛋白抗体改良马丁培养基 BR
MOG ELISA Kit (human) 抗髓鞘少树突胶质糖蛋白(人)麦康凯琼脂培养基(药典) BR
使用方法:
一:培养细胞预处理
1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。
2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二:组织细胞预处理
3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。
三:血液预处理
4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。
5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。
柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取
5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。
6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。
7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。
8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。
9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。
10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。
11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。
12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。
注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。
13. 重复上步1次。
14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。
15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。
16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。
17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。
18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。
19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。
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