牛副流感病毒3型（BPIV-3）检测试剂盒(荧光-PCR法)

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
冰冻切片组织TSH-BETA蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次Ras相关C3肉菌素底物1(Rac1)重组蛋白羧肽酶B（猪胰）

石蜡切片组织TSH-BETA蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次RNA结合基元蛋白20(RBM20)重组蛋白嘌呤核苷磷酸化酶

细胞TSH-BETA蛋白表达比色法定量检测试剂盒10/50 次RNA结合基元蛋白24(RBM24)重组蛋白红霉素

细胞TSH-BETA蛋白表达荧光定量检测试剂盒10/50 次Runt相关转录因子2(RUNX2)重组蛋白葡聚糖T110

TSH-BETA蛋白表达西方杂交分析试剂盒5次R-脊椎蛋白1(RSPO1)重组蛋白人H-ras ELISA试剂盒,

TSH-BETA蛋白共沉淀分析试剂盒5次R-脊椎蛋白3(RSPO3)重组蛋白人Ⅳ型胶原（ColⅣ）ELISA试剂盒,Col Ⅳ ELISA kit

TSH-BETA蛋白表达elisa试剂盒25次S100钙结合蛋白(S100)重组蛋白人羟脯氨酸糖蛋白（HRGP）ELISA试剂盒,HRGP ELISA

细胞IL蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒10/20次S100钙结合蛋白A11(S100A11)重组蛋白人激肽释放酶1（KLK 1）ELISA试剂盒, KLK 1 ELISA

载玻片细胞IL蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次S100钙结合蛋白A12(S100A12)重组蛋白小鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ（TNFsR-Ⅰ）ELISA试剂盒,

冰冻切片组织IL蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次S100钙结合蛋白A13(S100A13)重组蛋白小鼠游离脂肪酸（FFA）ELISA试剂盒,

石蜡切片组织IL蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次S100钙结合蛋白B(S100B)重组蛋白小鼠血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1（TSP-1）ELISA试剂盒,

载玻片细胞IL蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次Smad同源物7(Smad7)重组蛋白小鼠α干扰素（IFN-α）ELISA试剂盒,

冰冻切片组织IL蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次SPARC样蛋白1(SPARCL1)重组蛋白大鼠高敏状腺原氨酸（u-T3）ELISA试剂盒,

石蜡切片组织IL蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次TGFβ诱导早期应答基因1(TIEG1)重组蛋白大鼠促肾上皮质释放（CRH）ELISA试剂盒,

细胞IL蛋白表达比色法定量检测试剂盒10/50 次Tolloid样蛋白1(TLL1)重组蛋白大鼠间粘附分子3（ICAM-3/CD50）ELISA试剂盒,
牛副流感病毒3型（BPIV-3）检测试剂盒(荧光-PCR法)SDA(Human salivary duct autoantibody) ELISA Kit  人抗唾液腺导管组织抗体胰蛋白胨大豆琼脂培养基 BR

MSA(Human mitotic spindle apparatus antibody) ELISA Kit  人抗纺锤体抗体胰化大豆琼脂 BR

AKA(Human keratin antibody) ELISA Kit  人抗角蛋白抗体TTC营养琼脂 BR

pANCA(Human Perinuclear neutrophil cytoplasmic antibody) ELISA Kit  人抗中性粒核周抗体四硫磺酸钠煌绿增菌液基础 BR

cANCA(human neutrophil cytoplasmic antibody) ELISA Kit  人抗中性粒胞浆抗体胰酪胨大豆肉汤 BR

aPT1/aPT2(Human prothrombins antibodies) ELISA Kit  人抗凝血素抗体胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂 BR

PI Ab-IgG/IgM(human phosphatidylinositol antibody IgG/IgM) ELISA Kit  人磷脂酰肌抗体IgG/IgM胰酪胨大豆酵母浸膏肉汤 BR

Beta2-GP1 IgA/G/M(Human Beta2-glycoprotein 1 antibody IgA/G/M) ELISA Kit  人β2糖蛋白1抗体IgA/G/M胰蛋白月示-亚硫酸盐-琼脂培养基 BR