肉毒杆菌B型（CB-B）检测试剂盒（荧光-PCR法）

操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
B液：50毫升溴百里酚蓝乳糖胱氨酸琼脂人抗神经元核抗体2型/抗Ri抗体（ANNA-2/Ri）ELISA试剂盒, ANNA-2/Ri EL

1000cm2Bromocresol-purple azide broth 溴甲酚红紫叠氮肉汤人流行性腮腺炎（EP）ELISA试剂盒,EP ELISA

高质型ECL印迹化学发光溶液A液：100毫升Brucella agar 布鲁氏菌琼脂人状瘤病抗体IgM（HPV-IgM）ELISA试剂盒, HPV-IgM ELISA

B液：500微升Calcium caseinate agar acc.to FRAZIER and RUPP,modified人8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）ELISA试剂盒,8-OHdG ELISA

1000cm2酪蛋白钙琼脂人磷脂爬行酶1（PLSCR1）ELISA试剂盒,

持久型ECL印迹化学发光溶液A液：100毫升Campylobacter selective agar(base) 弯曲菌选择培养基人二氧化酶（DAO）ELISA试剂盒,

B液：500微升Campylobacter selective supplement 弯曲菌选择培养添加剂人基质金属蛋白酶5（MMP-5）ELISA试剂盒,

1000cm2　人D二聚体（D2D）ELISA试剂盒,

超敏型ECL印迹化学发光溶液A液：100毫升Candida selective agar acc.to NICKERSON 选择琼脂人糖化蛋白（GSP）ELISA试剂盒,

B液：500微升Caseinpeptone-lecithin-polysorbate broth (base)人桩蛋白（Pax）ELISA试剂盒,

1000cm2酪蛋白胨卵磷脂聚山梨脂肉汤人可溶性蛋白185（sp185/HER-2）ELISA试剂盒,

通用型DAB显色溶液A液：10毫升CASO broth casein-peptone soyameal-peptone agar USP(TSA)人降解加速因子（DAF）ELISA试剂盒,

B液：90毫升酪蛋白胨大豆胨琼脂USP（TSA）人嗜环蛋白/亲环素A（CyPA）ELISA试剂盒,

增强型DAB显色溶液A液：10毫升CASO broth casein-peptone soyameal-peptone broth USP(TSB)小鼠骨成型蛋白4（BMP-4）ELISA试剂盒,

B液：90毫升酪蛋白胨大豆胨琼脂USP（TSB）小鼠碱性磷酸酶（ALP）ELISA试剂盒,
肉毒杆菌B型（CB-B）检测试剂盒（荧光-PCR法）Tn-T(Human Troponin T) ELISA Kit  人肌钙蛋白T氯化金(III) 水合物 Au ≥48%

ES-Ab(Human Endostatin antibody) ELISA Kit  人血管内皮抑素抗体三氯化金水溶液 Au 23.5～23.8%

Agtr I a(Human angiotensin II receptor type I a) ELISA Kit  人血管紧张素Ⅱ受体Ⅰa型金丝/金粉 99.99%

ANGPTL3(Human angiopoietin-like protein 3) ELISA Kit  人血管**素样蛋白3乙酸银 AR,99.5%

Alpha Actin(Human Alpha-Actin) ELISA Kit  人α肌动蛋白碳酸银 AR,99.0%

ANKRD1(Human cardiac ankyrin repeat domain 1) ELISA Kit  人心肌锚蛋白重复域1氧化银 AR,99.7%  

LEPR(Human Leptin Receptor) ELISA Kit  人瘦素受体硝酸银 AR,99.8%

AT2R(Human Angiotensin II Receptor 2) ELISA Kit  人血管紧张素Ⅱ受体2硝酸银 99.99% metals basis

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