普氏立克次体（RP）检测试剂盒（荧光-PCR法）

操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
IL-12 P35（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Salmosyst broth base Salmosyst 肉汤基础Oxford Agar Base（SN标准）

IL-12 P40（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Salmosyst selective supplement tablets Salmosyst选择添加片党参炔苷 Lobetyolin

IL-13（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Selective agar for pathogenic fungi致病选择琼脂2-deacetyl wilformine 2-deacetyl wilformine

IL-14（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Selenite cystine enrichment btoth for microbiology2′-脱氧胸苷-5′-三磷酸三钠盐

IL-15（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SIM medium SIM培养基羧甲基琼脂糖凝胶CL-6B

IL-16（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SIMMONS citrate agar simmons柠檬酸盐琼脂癸酸

IL-17（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Sodium-chloride peptone broth(buffered) 蛋白胨肉汤（缓冲）人肝癌抗原（PHC）ELISA试剂盒,PHC ELISA kit

IL-18（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Sorbitol-MacCONKEY agar(SMAC agar)SMAC琼脂/山梨麦康凯琼脂人癌基因蛋白质p190/bcr-abl ELISA试剂盒,

IL-19（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SPS agar ANGELOTTI perfringens selective agar SPS琼脂/ANGELOTTI人抗网硬蛋白抗体（ARA）ELISA试剂盒, RA ELISA kit

ERK 1（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克产气荚膜菌选择琼脂梭人S100钙结合蛋白A8/钙粒蛋白A（S100A8）ELISA试剂盒,S100A8 ELISA K

ERK 2（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SS agar Salmonella-Shigella agar SS琼脂/沙门氏菌-志贺氏菌琼脂人乙型肝炎表面抗原（HBsAg）ELISA试剂盒,HBsAg ELISA

ERK 3（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SSDC agar(Salmonella-Shigella agar with sodium dexoycholate and calcium chloride) SSDC 琼脂/沙门氏菌-志贺氏菌琼脂（含脱氧胆盐氯化钙）人抗甲型肝炎病IgG抗体（anti-HAV）ELISA试剂盒, anti-HAV ELISA

ERK 5（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Standard count agar标准计数琼脂人军团菌抗体IgA（LP Ab-IgA）ELISA试剂盒,LP Ab-IgA ELISA

ERK 6（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Standard nutrient agar标准I营养琼脂人单纯疱疹病Ⅱ型抗体（HSVⅡ-Ab）ELISA试剂盒,HSVⅡ-Ab ELISA

GSK-3 Alpha（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Standard nutrient broth 标准I营养琼脂人D-乳酸脱氢酶（D-LDH） ELISA试剂盒,
普氏立克次体（RP）检测试剂盒（荧光-PCR法）UGT2B4(Human uridine dipho-sphate glucuronosyltransferase 2 family polypeptide B4) ELISA Kit  人二磷酸尿核苷葡糖酸基转移酶2家族肽B4氢化 98%

PPP1R1A(Human protein phosphatase 1 regulatory subunit A) ELISA Kit  人蛋白磷酸酶1调控/抑制因子亚基1A氢化钠 98%

ABCG2(Human ATP-binding cassette transporter G2) ELISA Kit  人腺苷三磷酸结合盒转运体G2吐温80 CP

GDI(Human Guanine nucleotide dissociation Inhibitor) ELISA Kit  人鸟苷酸解离抑制因子吐温80 药用级

OTF2B(Human octamer transcription factor 2B) ELISA Kit  人八聚体转录因子金属镓 SP

OTF2A(Human octamer transcription factor 2A) ELISA Kit  人八聚体转录因子金属镓 99.999% metals basis

DUTP(Human deoxyuridinetriphate) ELISA Kit  人脱氧尿三磷酸金属镓 99.9999% metals basis

CMR(Human costimulatory molecules recptor) ELISA Kit  人协同激分子受体金属镓 99.99999% metals basis

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