心病毒(SAFV)检测试剂盒(荧光-PCR法)

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品组成:

下列是公司正热销的产品：

细胞总脂蛋白胆固醇（Total L-Cholesterol）酶连续循环比色法定量检测试剂盒20次Schaedler Anaerobic Broth /Schaedler 厌氧肉汤氟铝酸钠

组织总脂蛋白胆固醇（Total L-Cholesterol）酶连续循环比色法定量检测试剂盒20次W.L.营养肉汤 (CM0501)人胰岛素样生长因子结合蛋白2（IGFBP2）ELISA试剂盒,

体液总脂蛋白胆固醇（Total L-Cholesterol）酶连续循环比色法定量检测试剂盒20次紫色麦康凯肉汤 (麦康凯肉汤 (US 配方)) (CM0005a)人抗心磷脂抗体IgM（ACA-IgM）ELISA试剂盒,ACA-IgM ELISA

细胞培养液总脂蛋白胆固醇（Total L-Cholesterol）酶连续循环比色法定量检测试剂盒20次紫色麦康凯肉汤 (US 配方) (CM0006a)人孕/孕酮（PROG）ELISA试剂盒,PROG ELISA

血液锂（lithium）化学比色法定量检测试剂盒50次无盐麦康凯琼脂 (CM0007b)人二氢嘧啶酶样3（DPYSL3）ELISA试剂盒,DPYSL3 ELISA

组织锂（lithium）化学比色法定量检测试剂盒50次缓冲蛋白胨水 (CM0509)人磷酯酶Cγ链（PLCγ1）ELISA试剂盒, PLCγ1 ELISA

土壤锂（lithium）化学比色法定量检测试剂盒50次卡里-布莱尔转运培养基 (CM0519)人酪氨酸激酶2（Tyk-2）ELISA试剂盒, Tyk-2 ELISA

血液锂（lithium）酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒20次Giolitti-Cantoni 肉汤 (CM0523)人胰淀粉酶（PAMY）ELISA试剂盒,

组织锂（lithium）酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒20次SS 改良琼脂(CM0533)人超氧化物歧化酶（SOD）ELISA试剂盒,

土壤锂（lithium）酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒20次Dermasel 琼脂 (CM0539)人血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子（VWF）ELISA试剂盒,

通用型N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）活性比色法定量检测试剂盒20次沙保氏麦芽糖琼脂 (CM0041a)人转甲状腺素蛋白（TTR）ELISA试剂盒,

细胞N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）活性比色法定量检测试剂盒20次产气荚膜菌琼脂基础 (OPSP) (CM0543)人NOD样受体（NLR）ELISA试剂盒,

组织N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）活性比色法定量检测试剂盒20次土霉素葡萄糖酵母提取物选择性培养基(OGYE培养基) (CM0545)人肽（Att）ELISA试剂盒,

血液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）活性比色法定量检测试剂盒20次虎红氯霉素琼脂基础 (CM0549)豚鼠血清总补体（CH50）ELISA试剂盒,

体液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）活性比色法定量检测试剂盒20次假单胞菌琼脂基础 (CM0559)兔氧化低密度脂蛋白抗体（OLAb）ELISA试剂盒,
心病毒(SAFV)检测试剂盒(荧光-PCR法)Human Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI ELISA Kit  人纤溶抑制因子/凝血酶激活的纤溶抑制物L-胱氨酸 99%

Human plaet membrane glycoprotein II b III a,GP- II b III a ELISA Kit  人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢaL-半胱氨酸盐酸盐，一水 99%

Human thrombospondin 1,TSP-1 ELISA Kit  人血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1L-谷氨酸 99%

Human alpha-granular membrane protein,GMP-140 ELISA Kit  人血浆α颗粒膜蛋白L-组氨酸盐酸盐，一水 99%

Human terminal complement complex C5b-9,TCC C5b-9 ELISA Kit  人末端补体复合物C5b-9L-组氨酸 99%

Human Complement 4,C4 ELISA Kit   人补体蛋白4L-异亮氨酸 99%

Human Complement 3,C3 ELISA Kit  人补体蛋白3L-亮氨酸 99%

Human coagulation factor II ,F II ELISA Kit  人凝血因子ⅡL-赖氨酸盐酸盐 99%

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

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