驴源性成分(Don)检测试剂盒(荧光-PCR法)

操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
细胞磷酸化酶活性染色试剂盒50次人肿瘤特异性抗原（TSA） ELISA试剂盒, TSA  ELISA kit

冰冻切片磷酸化酶活性染色试剂盒50次人抗中性粒抗体（ANA）ELISA试剂盒, ANA ELISA kit

全组织磷酸化酶活性染色试剂盒10次人青少年2型血色素沉着症/幼年型血色病相关蛋白2（HFE2）ELISA试剂盒,

细胞琥珀酸脱氢酶活性染色试剂盒50次大鼠新生甲状腺素（NN-T4）ELISA试剂盒,

冰冻切片琥珀酸脱氢酶活性染色试剂盒50次巨噬来源的趋化因子（MDC/CCL22）ELISA试剂盒--动物，人

全组织琥珀酸脱氢酶活性染色试剂盒10次WORT 琼脂用于,特别是酵母菌的计数和增菌培养（Merck方法）

细胞b-葡糖苷酸酶活性染色试剂盒50次麦 康凯琼脂     用于肠道致病菌的选择性分离、培养（OXOID方法）

冰冻切片b-葡糖苷酸酶活性染色试剂盒50次β-丙氨酸

细胞捺脂丙酸盐脂酶活性染色试剂盒50次6,7-二甲氧基 6,7-Dimethylesculetin

冰冻切片捺脂丙酸盐脂酶活性染色试剂盒50次Super Script Ⅱ阴性逆转录酶

细胞总脂酶活性格莫瑞（Gomori）染色试剂盒50次对基-β-D-吡喃半乳糖苷

冰冻切片总脂酶活性格莫瑞（Gomori）染色试剂盒50次6-甲基-7甲氧基

全组织总脂酶活性格莫瑞（Gomori）染色试剂盒50次5-鸟苷一磷酸二钠盐

细胞抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）活性染色试剂盒50次人P钙黏蛋白/胎盘钙黏蛋白（P-cad）ELISA试剂盒,

冰冻切片抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）活性染色试剂盒50次人单纯疱疹病Ⅰ型抗体（HSVⅠAb）ELISA试剂盒,HSVⅠAb ELISA
驴源性成分(Don)检测试剂盒(荧光-PCR法)HDL ISA Kit  大鼠高密度脂蛋白3,5-二羟基苯甲酸 97%

PGR ELISA Kit   大鼠孕酮受体3,4-二氨苯 98%

ACE II ELISA Kit  大鼠血管紧张素Ⅱ转化酶3,4-二氨苯 分析标准品

ACE I ELISA Kit  大鼠血管紧张素Ⅰ转化酶3,4-二氨苯 99.5%

GnRHR ELISA Kit  大鼠促性腺释放受体3,5-二甲氧基苯甲酸甲酯 99%

AMPK ELISA Kit  大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶2,4,6-三 98%

HSP47 ELISA Kit  大鼠热休克蛋白47对甲苯 AR,99.0%

GC ELISA Kit  大鼠内源性糖皮质三(羟甲基)氨烷 标准缓冲物质, ≥99.9% (titration)

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