禽流感病毒H5/H7亚型(AIV-H5/H7)检测试剂盒(双重荧光-PCR法)

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品组成:

下列是公司正热销的产品：

定量检测试剂盒叶酸测定培养基鸡N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)Elisa测定试剂盒

细胞冠状病毒3C类蛋白酶（SARS -CoV 3C-like PROTEASE）活性20次泛酸测定培养基鸡神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）Elisa测定试剂盒

荧光淬灭法定量检测试剂盒游离生物素测定培养基兔半胱氨酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C（Cys-C）Elisa测定试剂盒

组织冠状病毒3C类蛋白酶（SARS -CoV 3C-like PROTEASE）活性20次气单胞菌培养基基础芳香化酶/色素P450/P450抗体流式组化

荧光淬灭法定量检测试剂盒醋酸盐鉴别琼脂人瘤病16型E7抗体流式组化

细胞艾滋病毒1蛋白酶（HIV-1 PROTEASE）活性荧光淬灭法20次气单胞菌培养基添加剂原癌基因H-ras抗体流式组化

定量检测试剂盒支原体培养基基础敏感脂肪酸抗体流式组化

组织艾滋病毒1蛋白酶（HIV-1 PROTEASE）活性荧光淬灭法20次胰蛋白胨大豆琼脂蛋白激酶N2抗体流式组化

定量检测试剂盒布氏菌选择性培养基受体相关蛋白16抗体流式组化

细胞切割酶/β分泌酶（MENAPSIN 2；β－SECRETASE）活性20次改良rv培养基D-脯氨酸

荧光淬灭法定量检测试剂盒类杆菌-胆汁-七叶甙（BBE）琼脂链霉蛋白酶

组织切割酶/β分泌酶（MENAPSIN 2；β－SECRETASE）活性20次BCYE 琼脂(Legionella 琼脂)5´-核苷酸酶

荧光淬灭法定量检测试剂盒发酵蛋白胨                           牛血清白蛋白（第五组份）

细胞蛋白酶（PROTEASE）活性比色法定量检测试剂盒20次其它菌检测培养基盐酸林可霉素

组织蛋白酶（PROTEASE）活性比色法定量检测试剂盒20次BIGGY 琼脂硫酸巴龙霉素
禽流感病毒H5/H7亚型(AIV-H5/H7)检测试剂盒(双重荧光-PCR法)MMP-9/Gelatinase B ELISA Kit  大鼠基质金属蛋白酶9/明胶酶B1，2-环己二 99%

TIMP-1 ELISA Kit  大鼠基质金属蛋白酶抑制因子1四氧化锇 AR,99.95%

bFGF ELISA Kit  大鼠碱性成纤维生长因子PLA300-T2（二层单扶手车板式 ）静音推车 910(L)×600(W)mm 上层

MIP-5 ELISA Kit  大鼠巨噬炎症蛋白5小推车 单层四轮 长70cm  宽 48cm  高 85cm

sICAM-1 ELISA Kit  大鼠可溶性间粘附分子1S-联萘酚 99%

sVCAM-1 ELISA Kit  大鼠可溶性血管粘附分子1(R)-(-)-联萘酚磷酸酯 98%

IgA ELISA Kit  大鼠球蛋白AR-1,1'-联-2-萘酚 99%

IgE ELISA Kit  大鼠球蛋白E(S)-(+)-联萘酚磷酸酯 97%

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

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