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A-Hc2209-20 次
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pBM30 Toposmart Cloning Kit（TOPO克隆载体 原核表达）
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pBM30 Toposmart Cloning Kit（TOPO克隆载体 原核表达）保存条件：-20℃保存
产品介绍：
利用痘苗病毒的拓扑异构酶I(Topoisomerase I)的切割再连接的特点将PCR产物定向克隆到线性化的pBM30原核表达载体中。适用于克隆由Pfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5等高保真DNA聚合酶扩增的平末端PCR产物。引物T7和T7t可用于菌落PCR和测序鉴定。
产品特点：
（1） 连接反应仅需 5 分钟 （2） 只适合平末端PCR 产物的快速、高效、定向克隆。 （3） 载体采用了新的制备工艺，零背景，无需蓝白斑筛选。 （4） 具有T7 启动子，类似于 pET30 载体，具备原核表达所需的所有调控元件。适用于外源基因在大肠杆菌中的高水平表达。 （5） 带 His.tag 和 S.tag 两种纯化标签。 （6） 具有凝血酶和肠激酶两种蛋白酶酶切识别序列。 （7） 载体具有卡那霉素抗性。
注意事项：
（1） 引物要求：PCR 引物 5’端不能进行磷酸化修饰，普通商业化引物即可。上游引物的 5’端添加 CACC 四个碱基。如果表达蛋白需 C 端带 6His 标签，下游引物则需要去掉基因本身的终止密码子（3 个碱基）。目的蛋白的翻译终止由 6His 标签的终止密码子TGA 来实现。 （2） DNA 聚合酶：选用 Pfu、sPfu、Phusion、Q5、KOD 和 Xerox 等高保真 DNA 聚合酶用于 PCR 扩增。 （3） 连接时间：5-15 分钟，一般为 15 分钟。
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