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A-Hc2211-20 次
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pBM40 Toposmart Cloning Kit（TOPO克隆载体 真核表达）
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pBM40 Toposmart Cloning Kit（TOPO克隆载体 真核表达）保存条件：-20℃保存
产品介绍：
利用痘苗病毒的拓扑异构酶I(Topoisomerase I)的切割再连接的特点将PCR产物定向克隆到线性化的pBM40哺乳动物表达载体中。适用于克隆由Pfu、sPfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5等高保真DNA聚合酶扩增的平末端PCR产物。引物CMVforward和SV40PolyArev可用于菌落PCR和测序鉴定。
产品特点：
（1）连接反应仅需 5 分钟。 （2）只适合平末端 PCR 产物的快速、高效、定向克隆。 （3）载体采用了新的制备工艺，零背景，无需蓝白斑筛选。 （4）具有 CMV 启动子，适用于外源基因在哺乳动物细胞中的表达，带新霉素抗性基因，便于稳转细胞株的筛选。C 端带 FLAG 标签序列便于表达的目的蛋白质的检测。 （5）相对于 pcDNA3.1 等其它哺乳动物表达载体，pBM40载体具有更小的质粒骨架，转染效率高。 （6）载体具有卡那霉素和新霉素抗性。
注意事项：
（1）引物要求：PCR 引物 5’端不能进行磷酸修饰，普通商业化引物即可。上游引物的 5’端添加 CACC 四个碱基（CACC 为真核表达所必需的 Kozak 序列）。如果目的蛋白需要在 C 端带 FLAG 标签，下游引物则需要去掉基因本身的终止密码子（3 个碱基），目的蛋白的翻译终止由 FLAG 标签的终止密码子 TAA（位于 Xho I 酶切位点前）来实现。 （2）DNA 聚合酶：选用 Pfu、sPfu、Phusion、Q5、KOD 和 Xerox 等高保真 DNA 聚合酶用于 PCR 扩增。 （3）连接时间：5-15 分钟，通常用 15 分钟。 （4）连接温度：室温 (22℃-30℃)，可使用 PCR 仪控温。*佳反应温度为 25℃。若片段存在高 GC 等复杂结构，可在 37℃反应。
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