商品属性:
货号
规格
产品名称
A-PJ1105-50 ml
50 ml
Super ECL Substrate
A-PJ1105-500ml
500ml
储存条件:
Super ECL Substrate储存:2-8°C,Super ECL A 要求避光保存。
产品介绍:
超敏 ECL 显色液用于 Western、Northern 和 Southernblot 分子杂交的化学发光检测,比传统化学显色法灵敏度高,可达 pg 水平。原理是采用新型发光底物(Luminol),其与辣根过氧化物酶反应时产生很强的发光信号,在暗室中对X-光片感光,以此检测微量蛋白而获得理想的实验结果。海基增强型 ECL 显色液具有灵敏度高,持续时间长等特点。
应用:
在 Western 印迹分析,核酸杂交以及 EMSA 实验中,HRP标记的二抗或探针与靶分子结合再与底物反应产生可见光。
操作方法:
1.按每平方厘米膜面积用 0.1-0.2 ml 配置显色液:根据显色液的需要量,取等体积 A 液和 B 液,混匀后避光保存备用;该显色液必须现配现用。 2.2. 取出膜,平放在干净的保鲜膜上,膜的正面(蛋白质面)朝上,在膜的中央加适量的配置好的显色液(6×8 cm 的膜加 2 ml 显色液),溶液向四周迅速扩散,覆盖所有膜面。室温保温 5 分钟左右,在此过程中请仔细观察信号的出现。注意:如果信号强,在暗室中能很快看到阳性信号出现。 3.3. 待信号出现且稳定后,用镊子夹起膜,除去多余的显色液,平放在干净的保鲜膜上,膜的正面(蛋白质面)朝上,在转移膜的上面再覆盖一层保鲜膜,除去保鲜膜与转移膜之间的空气泡,请务必保证保鲜膜是干净的,不被其他杂物或液体污染。 4.4. 在暗室中,将膜的正面对着 X-光片,放入暗盒。**次曝光时间在 1 分钟左右(有经验的操作者可以根据信号的强弱自行决定),立即按要求对 X-光片进行显影和定影,确定*佳曝光时间。曝光时间从数秒到��小时不等;特别弱的过夜曝光也可。 注意 1.PVDF 膜较硝酸纤维膜能更好的结合蛋白,因此呈现较强的信号。选高质量的 PVDF 膜;尽可能不用 Nylon 膜。 2.2.与抗体结合以后,要保证膜处于湿润状态,否则会导致背景较高。 3.3.没有信号的原因:有些抗体不识别变性抗原,有时需要考虑电泳过程对蛋白质结构的影响;样品中无待测蛋白质或含量过低;一抗效价低,用量少,可适当增加一抗的用量; 4.4.背景过高原因:转移膜封闭不充分;与抗体孵育后洗涤不彻底;膜在处理过程中过干;二抗用量过多等。 5.5.注意及时更换显影液、定影液。
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