多肽合成仪的功能操作

多肽合成仪的功能操作

        工作原理
        多肽合成仪采用固相合成作为反应原理。在密闭的防爆玻璃反应器中，按已知的顺序（顺序，一般是从C端到N端再到N-氨基端）不断加入氨基酸，反应、合成、操作，*终得到多肽载体。固相合成法大大降低了每一步产品纯化的难度。为了防止副反应的发生，参与反应的氨基酸的侧链受到保护。羧基末端是游离的，必须在反应前活化。有两种固相合成方法，即 Fmoc 和 tBoc。因为Fmoc相比tBoc有很多优势，大部分都是用Fmoc的方法合成的，但是对于一些短肽来说，tBoc由于产量高的优势还是被很多公司采用。
        具体的合成包括以下循环：
         1）脱保护：Fmoc保护的柱子和单体必须用碱性溶剂（哌 啶）脱去氨基的保护基。
         2) 活化和交联：下一个氨基酸的羧基被活化剂活化。活化的单体与游离氨基反应形成肽键。在这一步中，使用了大量的超浓缩试剂来推动反应完成。循环：两步反应反复循环，直至合成完成。
         3) 洗脱脱保护：肽从柱子上洗脱下来，其保护基通过脱保护剂（TFA）洗脱和脱保护。
        基本组件
        反应堆
        数百年来，制药工业中的反应器/反应器设备一直由玻璃制成。由于其透明性和耐腐蚀性，已被许多化学和生物专家使用。多肽合成过程需要操作人员直观监控，合成后可在线切割（切割试剂TFA的强腐蚀性极大地限制了反应器的材质）。这些要求限制了反应器由玻璃制成。
        玻璃料反应釜在制造工艺上有很大的难度限制：①烧成工艺：研磨精度极高，就像国内很多设备达不到要求，漏液和玻璃壁的均匀性等. . ②具有搅拌手柄和密封装置的完整加工工艺 ③防爆处理
        氨基酸储罐
        用于储存氨基酸粉末或预活化的溶解氨基酸溶液。小型合成器的氨基酸储罐数量一般在20-40个之间，以保证全自动缩合反应在无人看管的情况下顺利进行。大型合成器根据生产规模有不同的配置。
        溶剂储罐
        用于储存多肽合成过程中所需的有机溶液，如DMF、PIP等。
        量筒
        用于测定氨基酸溶液和其他试剂的合成量。它需要一个精密传感器来设计秤并将信息返回给计算机控制程序。由于早期的恒压法偏差大，操作繁琐，故采用此法进行测量。触发器的数量取决于不同客户的要求，不同品牌略有不同。
        转移瓶
        传感器
        多端触发自感应定量测量方法，直观、科学、相对误差*低。代替早期的恒压法，避免了每天进行大量的数**算，运算更简单，测量误差值可控制在1%以内。
        废液桶
        废液桶通常是一个大的HDPE桶，以保证良好的通风。同时，需要安装感应装置，随时检测废液，避免溢出。
        控制配件
        电磁阀
        肽合成仪中的电磁阀是一个灵敏的附件，它控制着液路的串联和闭合回路，在氨基酸转移与测定、溶剂转移与测定两个步骤中起着非常重要的作用。不同品牌的合成器的电磁阀设计和布置略有不同。
        控制面板
        控制面板通常包含光敏元件、一些控制电磁阀和传感器控制组。它与上位机和合成仪的控制系统统一联动，完成多肽合成的全过程。
        软件系统
        肽合成仪的操作软件。不同品牌的合成器有不同的注册软件。
        检测方法
        a) 紫外线监测器
        在多肽合成仪中，用于在线检测偶联效应的设备，如UV Monitor，往往是可选设备，客户可根据实验需要选购。它的作用是让操作者可以直观的看到肽合成中各个氨基酸的偶联效果，从而针对特定的序列调整合成设置，*终达到*佳的合成效果。
        对于不熟悉多肽合成仪操作的用户来说，UV Monitor非常重要。
         b) 试剂检测
        肽合成仪用户未购买在线检测配件，也可以使用试剂检测方法进行基本的偶联效应测定实验。
        在固相肽合成中，连接效率主要通过检测树脂上的游离氨基来确定。该检测方法称为Kaiser方法。如果有游离氨基，检测结果呈蓝色。，或红棕色（pro，ser，His）。
         Kaiser试剂包括：A、6%茚三酮乙醇溶液； B、80%苯酚乙醇溶液； C、2% 0.001M KCN吡啶溶液。制剂中的吡啶需要用茚三酮处理后重新蒸馏使用。检测过程中，取少量树脂，加入A、B、C各2-3滴，100℃加热1-2分钟。如果溶液呈蓝色，或树脂呈蓝色或红棕色，则表明存在游离氨基。否则，表明连接完成。