DNA合成仪的操作步骤

DNA合成仪的操作步骤

        以亚磷酰胺寡核苷酸的合成为例，介绍该类仪器的一般操作步骤。亚磷酰胺DNA合成试剂包括：5/-DMT保护碱基，A、G、C、T的亚磷酰胺单体，四唑偶联催化剂，醋 酸 酐，N-甲基咪唑封闭剂，三***（TCA）脱保护液，12氧化混合物、乙腈清洗溶剂、除氨溶液。使用步骤如下：
         1）仔细检查合成仪上所有试剂瓶的试剂量，必要时更换试剂瓶，特别注意乙腈的量，因为溶剂量比较大。
         2) 将标记好的干净收集瓶放在合成器上。
         3) 将要合成的DNA序列输入合成仪。
         4) 检查选择的合成步骤是否正确。
         5) 选择结束方式：TritylOffAuto 为仪器的原始状态。如果您打算将纯化的寡核苷酸与 5-DMT 基团连接，请将其更改为 TritylOnAuto 的结束状态。
         6）选择结束方式，一般是系统的原始状态。
         7) 在每个列监视器的用户名下，输入要保存的名称。
         8) 用代码代替相应的 DNA 序列标记每个收集瓶。
         9) 打印出每列设置的详细信息。
         10) 检查打印信息是否正确。
         11) 运行StartColumn 步骤，检查每一列的位置，确保合成器上的合成列处于正确位置。
         12）检查与合成器相连的溶剂残留物（废液瓶）是否已满。
         13）如果使用部分收集器收集DMT各脱保护步骤的流出物，确保试管足够干净，打开部分收集器，确保DMT废液管线通向部分收集器。
         14) 启动循环，运行启动程序，清洗试剂管路，取出原试剂。
        注：TritylOnAuto 表示合成寡核苷酸的5端有一个DMT，从固体载体上切下，保存在收集瓶中； TritylOffAuto 表示合成寡核苷酸 5. 末端核苷酸无保护基团，从固体载体上切下，保存在收集瓶中； TritylOnManual是指合成寡核苷酸的5末端核苷酸有DMT，寡核苷酸没有从固体载体上切下来，但保存在合成柱中； TritylOffManual是指在合成寡核苷酸的5中，末端核苷酸没有保护基团，寡核苷酸没有从固相支持物上切断，而是留在合成柱中