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高效液相色谱仪测定胭脂虫红色素的含量

高效液相色谱仪测定胭脂虫红色素的含量

含胭脂虫红色素的样品用液一液萃取后通过高效液相色谱仪进行分析，并通过比较测定的光谱与胭脂虫红的紫外可见谱图库来进一步确证。

一、仪器设备

高效液相色谱仪，配紫外检测器；

紫外分光光度计；

电热恒温水浴锅；

旋转蒸发器。

二、试剂与材料

胭脂虫红；

甲醇，色谱纯；

重蒸去离子水；

硫酸和乙酸铵，分析纯；

三正辛胺，分析纯。

三、标准溶液配制

准确称取胭脂虫红对照品50.0 mg于100 mL容量瓶中，用重蒸去离子水溶解定容，配成0.50 g／L的标准溶液储备液。

四、样品前处理

取样品约20 g，用水反复漂洗色素，合并洗液作为样品液；若样品为肉制品，先用绞碎机绞碎，加90 mL无水石油醚分3次去除脂肪，再用热水分3次萃取色素，合并萃取液为样品液。样品溶液放入分液漏斗中，加2 mL浓盐酸、10 mL三正辛胺正丁醇溶液(体积分数5％)，振摇提取，重复提取3次。合并有机相，浓缩至10 mL，用10 mL饱和硫酸钠溶液洗2次。转移至分液漏斗中，加50 mL正己烷混匀，用2％(体积分数)的氨水提取3次，每次5 mL，收集解吸液，加乙酸中和，减压蒸干(40℃以下)，加水溶解定容至5 mL，经滤膜(0.45um)过滤，取20ul进高效液相色谱仪。

五、色谱条件

色谱柱：XB—C18(4.6mm×250mm，5um)；

流速：1.0 mL／min；

进样量：20ul；

流动相：0.02 mol／L乙酸铵和甲醇；

梯度洗脱程序：甲醇20％～35％，0～5 min；

35％～98％，5～10min；

98％，保持6 min；

柱温：25℃；

检测波长：280nm。

高效液相色谱仪测定胭脂虫红色素的含量

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