大鼠络丝蛋白(RL)ELISA检测试剂盒

发布时间：2017-08-25

大鼠络丝蛋白(RL)ELISA检测试剂盒

用途：用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中络丝蛋白(RL)的测定。

检测原理

本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联**吸附法（ELISA）测定样品中大鼠络丝蛋白(RL)的水平。向预先包被了大鼠络丝蛋白(RL)单克隆抗体的酶标孔中加入络丝蛋白(RL)，温育；温育后，加入生物素标记的抗络丝蛋白(RL) 抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成**复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅与样品中大鼠络丝蛋白(RL)的浓度呈正相关。

试剂盒组成

	名称	96孔配置 12孔×8条	48孔配置 12孔×4条	备注
1	标准品（300ng/ml)	0.5ml	0.5ml	稀释即用型
2	酶标包被板	1块	1块	已包被即用型
3	标准品稀释液	3ml	3ml	即用型
4	链霉亲和素-HRP	6ml	3ml	即用型
5	30x倍浓缩洗涤液	20ml	20ml	蒸馏水稀释
6	生物素标记的抗-络丝蛋白(RL) 抗体	2ml	2ml	即用型
7	显色剂A液	6ml	3ml	即用型
8	显色剂B液	6ml	3ml	即用型
9	终止液	6ml	3ml	即用型
10	说明书	1份	1份	即用型
11	封板膜	2张	2张	不可反复使用
12	密封袋	1个	1个	即用型

需要而未提供的试剂和器材

1. 酶标仪(450nm检测波长滤光片，570nm或630nm校正波长滤光片) 。

2. 洗板机（可调注液量，保证每孔洗液加至0.35ml而不溢出）。

3. 超净工作台，生物**柜，通风柜。

4. 高精度单道加液器（量程为0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).

5. 高精度多道加液器（8道或12道，量程为50-300μl).

6. 37℃恒温箱。

7. 低温离心机。

8. 电冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.

9. 漩涡混合仪，低频振荡器等

注意事项

1．从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

3．为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

4．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

5．底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

6. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸，使用时必须注意**。

7. 各步骤加样均应使用加样器，并经常校准其准确性，以避免试验误差。一次加样时间*好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

8. 每次试验测定的同时做标准曲线，。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*高浓度的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请*后乘以总稀释倍数（×n）。

9. 配制试剂时，要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂，充分混匀对测试结果尤为重要，*好使用微量振荡器(使用*低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻晃动酶标板1分钟，例如做圆周动作，使加入孔中的反应液混匀。

10. 实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作，并在使用前充分预热。

11. 手工洗板应注意：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

样本要求

1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存或根据存放，时间做相应温度调整，但应避免反复冻融，（由于样本种类过多，每个单位处理方式不一样，本说明书不做详细介绍）。

操作程序

1．标准品的稀释：（本试剂系统提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）按下表格执行：

150ng/ml	（5号标准品）	120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液
75ng/ml	（4号标准品）	120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液
37.5ng/ml	（3号标准品）	120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液
18.75ng/ml	（2号标准品）	120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液
9.375ng/ml	（1号标准品）	120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液

2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3．加样：1）空白孔：（空白对照孔不加样品，生物素标记的抗络丝蛋白(RL)抗体，链霉亲和素-HRP，其余各步操作相同 ；2）标准品孔:加入标准品50μl，链霉亲和素-HRP50μl（标准品中已事先整合好生物素标记抗体，故在操作时不加，只加链霉素-HRP）；3）样本反应孔：加入样本40μl，然后各加入抗- 络丝蛋白(RL)抗体10μl、链霉亲和素-HRP（空白孔除外）50μl。盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育60分钟。