miRNA质粒载体

miRNA质粒载体 

MicroRNA（miRNA）是一类真核生物内源性的小分子单链RNA，通常长为18~25nt，能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对结合，引起靶序列降解或抑制其翻译，从而对基因进行转录后的表达调控。

MicroRNA 表达载体构建

MicroRNA（miRNA）是一类真核生物内源性的小分子单链RNA，通常长为18~25nt，能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对结合，引起靶序列降解或抑制其翻译，从而对基因进行转录后的表达调控（如右图所示）。SYNTHBIO MicroRNA载体利用CMV启动子可以在众多哺乳动物细胞中快速、高效、持续表达pre-miRNA，经过Drosha（RNaseⅢ）作用形成small hairpin pre-miRNAs（约70nt），再过Dicer作用形成成熟的microRNA（约22nt），作用靶mRNA，起到表达调控作用。

microRNA过表达载体

SYNTHBIO提供两种过表达的方式：

1. 从天然的基因组序列中表达pre-miRNA转录本构建pre-microRNA。插入序列不仅包含pre-miRNA茎环结构，同时构建100-200bp长的上下游两端的侧翼序列。使用使用pol-Ⅱ（如CMV）启动子，这种构建方式保证高水平的表达pre-microRNA。表达出来的pre-miRNA的生理活动尽可能接近天然状态。

使用这种构建方式，客户只需提供miRNA的具体信息及指定过表达载体类型（如SYNTHBIOpEX系列 M核过表达载体ﻉ，我们完成序列合成，质粒构建。

2. 利用SYNTHBIO优化过的载体，模拟内源miRNA-155的表达模块，这种构建方法解决了不同miRNA表达效率差异的问题，同时也有效的避免了有些内源miRNA表达时产生-3p，-5p的问题。miRNA的发夹序列融合在EGFP报告基因的后面，模拟miRNA在体内的成熟过程。

备注：保证插入序列正确，不保证miRNA的过表达效率，不保证转染效率。所有实验仅供科研使用。

microRNA抑制子表达载体

SYNTHBIO提供两种miRNA抑制子载体构建的方式：


1. ;)PAN>利用SYNTHBIO优化过的载体，模拟内源miRNA-155的表达模块，来表达miRNA inhibitor序列。这种构建与SYNTHBIO miRNA过表达方式2使用同样的载体系统，方便客户使用同一套系统完成miRNA的过表达与抑制。
使用这种构建方式，客户只需提供miRNA的具体信息，我们完成序列合成，质粒构建。

miRNA sponge的特点：

a. 由于miR Sponges是由质粒编码的，它能够通过真核表达载体达到稳定沉默细胞microRNA的目的；
b. 能够沉默整个家族的microRNA以达到对整个家族microRNA功能的研究；
c. 可以利用miR Sponges实现体内外loss of function研究；
d. 可以用来检测luciferase靶基因报告系统分析；
e. 可以自由组合串联不同miRNA抑制子序列，达到沉默多种不同miRNA的目的。
使用这种构建方式，客户需提供miRNA的具体信息、预构建miRNA inhibitor的重复数及预构建inhibitor的序列信息，我们完成序列合成，质粒构建。

SYNTHBIO公司已经利用自己的miRNA载体骨架成功构建为数众多的miRNA的过表达载体，载体库中的miRNA expression vectors 1周之内即可出货，价格更优。

2. miRNA sponge（海绵）载体构建：SYNTHBIO通过构建载体，表达包含多个成熟miRNA结合位点的RNA序列，通过吸附结合成熟miRNA，从而抑制miRNA的作用，从而进行功能缺失性研究。

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