当CAR-T遇到CRISPR

近年来肿瘤****因其显著疗效和**性备受关注，是肿瘤**中*具有前景的研究方向之一。CRISPR基因编辑系统的发展以及其在多领域的延伸应用让研究者看到了它的巨大潜力，在肿瘤****研究中也显示出广泛的应用前景。在过继性细胞**中，主要通过分离患者自身的T细胞进行个体化回输，因受到分离T细胞的数量和异体排斥的影响，不利于大规模临床应用。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建健康人来源的通用型T细胞则可避免这种限制。CRISPR/Cas9可对TCR-T和CAR-T细胞的内源性TCR以及HLA-Ⅰ分子的基因进行敲除得到通用型效应细胞。

多基因敲除的研究，基本是在T**细胞上完成的，在CAR-T上进行多基因敲除既要完成基因敲除又要实现CAR-T的表达在技术上实现较为困难。脂质体法、磷酸钙法等常规方法难以实现针对**细胞的高效转染。利用病毒载体多次感染带有要敲除的目的基因的sgRNA的CRISPR/Cas9载体和CAR载体，并且因多次病毒感染细胞活性降低，因此只能用电转才能实现转染载体的目的。

我们来看下肿瘤****先驱之一CarlJune教授是怎样实现高效CRISPR编辑T细胞的。2016年11月CarlJune教授在Clinical Cancer Research杂志上发表一篇论文（Multiplexgenome editing to generate universal CAR T cells resistant to PD1 inhibition），在这篇文章的PROTOCOL中详细介绍了如何通过CRISPR/Cas9技术对T细胞进行高效编辑，细胞转染的部分都是通过BTX电转仪实现的。