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介绍
在基础研究和工业生产中发现的支原体污染是一个严重的问题,感染了87%的细胞系。与细菌和真菌污染不同,细胞培养状态下的支原体污染很难通过视觉和嗅觉来了解。正常情况下,支原体存在于培养细胞中,水平为 1 x 10e6 ~ 1 x 10e8 cfu/ml,但不能用倒置显微镜观察。支原体感染会改变真核细胞的生长和形状,影响细胞功能,因此实验结果差异很大。因此,定期使用支原体检测试剂盒检查支原体的存在非常重要。
PlasmoTest™ - 基于细胞的色彩反应性产品
[原理]
PlasmoTest™ 是一种基于细胞的比色测定法,它利用 Toll 样受体 2 (TLR2) 识别支原体的能力。如果培养基中存在支原体,则 HEK-Blue-2™ 细胞表面的 TLR2 被激活,从而激活 NF-κB 和 AP-1。这些转录因子*终诱导 SEAP(分泌的胚胎碱性磷酸酶)的分泌,导致含有 HEKBlue™ 检测的培养基出现紫色/蓝色变化。因此,支原体感染的存在可以用肉眼或OD 620-655nm确定。
[特征]
-灵敏度:在培养物中检测高达5*10^2 ~5*10^5 cfu/ml-特异性:检测各种可能被污染的粘原体-快速:处理时间小于1小时,O/N孵育后可确认
结果-简单 :细胞培养上清液可以通过
变色进行检查-可靠:无假阳性
[商品包括]
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PlasmoTest™ comprises the HEK-Blue™-2 cells (3-7x 10e6 cells)
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HEK-Blue™ Selection (250X, 2 ml)
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HEK-Blue™ Detection (1ea/50 ml)
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HEK-Blue™ water (60 ml)
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Normocin™ (500X, 1 ml)
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Positive control & negative control (1 tube each)
[如何使用PlasmoTest™]
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细胞培养上清液收集500μl用于支原体测试
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100°C,热处理15分钟
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通过将 HEK-Blue 检测溶解在 50 ml HEK-Blue™™ 水中(使用前过滤)制备
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将热处理的样品以50μl的增量转移到96孔板中
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所包含的对照品也以50μl的增量转移到96孔板中
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在预热的 HEK-Blue™ 检测培养基中制备 HEK-Blue-2™ 细胞悬液(剩余的 HEK-Blue-2™ 细胞在细胞储存后*多可使用 30 次传代)
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每孔加入 200 μl(~50,000 个细胞)细胞悬液
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在37°C的CO 2培养箱中过夜(16-24小时)
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支原体的存在可以用肉眼确认,也可以通过OD 620-655nm的显色来确认
[表格 1.] 敏感性
订购信息
产品名称
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规格
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货号
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PlasmoTest™
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1 kit (250 samples)
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rep-pt1
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PlasmoTest™ Reagent Kit
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Refill kit (500 samples)
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rep-ptrk
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HEK-Blue™ Detection
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5 pouches
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hb-det2
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HEK-Blue™ Selection
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10 x 1 ml
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hb-sel
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Normocin™
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500 mg
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ant-nr-1
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PlasmoTest™ Controls
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200 tests
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pt-ctr2
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** 购买单个 PlasmoTest™ 后,您可以购买补充试剂盒,即[rep-ptrk] PlasmoTest™ Reagent Kit.