**印迹及**沉淀用裂解液（不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂）

Lysis Buffer for WB/IP Assays (Without Enzyme Inhibitors) **印迹及**沉淀用裂解液（不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂）

产品信息：

产品描述：

本品WB/IP裂解液，是一种非变性条件下的裂解液，可以有效维持原有的蛋白间的相互作用。其主要裂解成分为1%的Triton X-100，不含蛋白酶、磷酸酶等抑制剂，裂解得到的蛋白样品可用于Western、IP、CoIP以及许多兼容1%Triton X-100的酶活性或者生物小分子的检测。

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。

-20℃保存，一年有效。尽量避免反复冻融，建议分装后使用。

注意事项：

1）本品不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂，使用前请根据实验情况添加合适酶抑制剂或不加酶抑制剂。

2）裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

3）如果WB/IP裂解液得到的蛋白样品是用于酶活性测试或一些生物小分子的检测，需要测试标准品用该裂解液稀释后是否会显著影响标准曲线，如无显著影响，则可继续使用。

4） 用WB/IP裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（FuShen CAT NO.FS1026）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

5）为了您的**和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法：

(一) 细胞样品

1）融解WB/IP裂解液（无抑制剂），混匀。取适当量的裂解液，根据实验目的决定是否添加适当酶抑制剂。

2）贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，需分装成5×105～1×106个细胞/管，然后再裂解。因为大团细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。

3）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、**沉淀、**共沉淀、酶或生物小分子检测等操作。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150μl或200μl。

（二）组织样品：

1）把组织剪切成细小的碎片。

2）融解WB/IP裂解液（无抑制剂），混匀。取适当量的裂解液，根据实验目的决定是否添加适当酶抑制剂。

3）按照每20mg组织加入100-200μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

4）用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、**沉淀和**共沉淀等操作。

6）如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。

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