Gibco 胶原酶

产品名称: Gibco 胶原酶

产品型号：17100017

产品包装：100mg

产品品牌：Gibco

产品介绍：

胶原酶（来自梭菌（clostridium histolyticum））是一种蛋白酶，对Pro-X-Glyc-Pro序列中的中性氨基酸（x）和甘氨酸之间的键具有特异性。该序列在胶原中以高频率存在，并且在蛋白酶中是独特的，其降解通常在结缔组织中发现的三螺旋天然胶原原纤维的能力。

      常用于组织解离的胶原酶是含有梭菌肽酶A和许多其他蛋白酶，多糖酶和脂肪酶的粗制剂。这种粗酶理想地适用于组织解离，因为它含有攻击天然胶原蛋白和网状纤维所需的酶，以及水解结缔组织和上皮组织细胞外基质中的其他蛋白质，多糖和脂质的酶。

      粗胶原酶确实表现出批次之间的差异，并可能偶尔产生毒性。 Invitrogen试图通过基于每种制剂中各种酶水平与解离某些组织的有效性之间的相关性对其粗胶原酶批次进行组织分型来*小化这些困难。

使用说明：

A.准备库存和工作解决方案

将未处理的冻干酶溶解于HBSS（目录号14025）中。用经细胞培养批准的过滤装置过滤溶液。粗胶原酶*常使用的浓度为0.1至0.5％（W / V）或50至100U / mL。一旦重新使用立即使用或储存冷冻。在使用前立即在冰箱中解冻。

B.组织解离

•用无菌手术刀或剪刀将组织切碎。

•在HBSS中洗涤组织数次。

•将组织碎片浸泡在+ 37°C。使用摇动平台并用3mM CaCl 2补充消化物获得提高的效率。

C.Organ灌注

•将消化物预热至+ 37°C，并以特定器官预先优化的速率灌注。加入3mM CaCl2可提高解离效率。

•通过使混合物通过无菌不锈钢或尼龙网，将分散的细胞和组织碎片与较大的碎片分离。如果需要进一步解聚，可以将新鲜的胶原酶溶液添加到片段中。

•洗几次以消除碎屑和酶溶液。密度分离步骤（Nycodenz）将提供更清洁的悬浮液。

•将沉淀重悬于培养基中并在预定条件下孵育。