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温育是ELISA测定中影响测定成败zui为关键的一个因素

日期:2024-08-07 16:26
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摘要: 温育是ELISA测定中影响测定成败zui为关键的一个因素。ELISA作为一种固相**测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。zui为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。
       从临床应用角度考核检修试剂的可靠性,是以其能否区分健康与**的能力作为依据的。检定内容除包装、标签、说明书等外,对试剂的机能,如特异性、敏捷度、精密度和线性等均需逐项检定,通过对一系列参比品的检测,结果符合要求者才为合格。部临检中央对乙肝ELISA诊断试剂在这方面进行了工作,通过质量评价,促进了试剂质量的进步。进行这种评价,首先需要收集有关的病人血清,然后用公认的检测该项标志物zui可靠的试剂进行测定,以确定其为阳性或阴性。目前还很难找到100%可靠的试验,任何试验都会泛起假阳性或假阴性。这一组表明测定物为阳性或阴性的血清组成"血清盘"(panel)。小鼠ELISA试剂盒实验中如何正确温育
    温育是ELISA测定中影响测定成败zui为关键的一个因素。ELISA作为一种固相**测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。zui为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。 
    温育这一步是临床ELISA测定中zui容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟~1小时,进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1~2小时才能有较完全的结合,低于1小时,可能会影响测定下限。因此,关于温育,在实际测定操作中一定要注意以下几点: 
    ELISA试剂盒要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说,加完样本和/或反应试剂后,将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃,需要一定的时间,尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下,这段升温时间可能还比较长,而在临床实验室中,很少有人注意这个问题,通常是将微孔板一放入恒温箱即开始计时,这样就很容易造成实际测定中温育的时间不够,弱阳性样本测不出来的问题。 
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