新闻详情
为何优化流式实验?具体又有哪些?
日期:2024-08-07 16:21
浏览次数:113
摘要:
流式细胞术(FCM)工作流程中的所有步骤对获取可发表的高品质图像都至关重要。尤其是利用正确的抗体去识别抗原以及放大信号是实现*佳显示的关键。
为何优化流式实验?
流式细胞术(FCM)工作流程中的所有步骤对获取可发表的高品质图像都至关重要。尤其是利用正确的抗体去识别抗原以及放大信号是实现*佳显示的关键。
抗体滴定方法
用同种细胞,相同细胞数量与反应体积,加入不同量的抗体计算阳性峰荧光强度及信噪比(S/N>3)。
1、滴定的浓度范围尽量大,至少5个左右。
区分死细胞的方法
死细胞的自发荧光水平很高,且容易摄取抗体导致非特异性结合,*终影响实验结果;还可能会释放DNA,DNA非常粘稠,会导致细胞成团,容易堵塞管路。
死细胞特性:细胞膜渗透性增强,失去膜完整性
DNA结合染料: PI, DAPI, 7-AAD, TO-PRO-3等DNA染料只会进入细胞膜受损的细胞,结合到细胞的DNA上,
蛋白结合染料:结合细胞表面或膜内的游离胺,活细胞弱阳,死细胞强阳。可以用在固定标本中的,区分样本固定细胞状态。
FC受体封闭试剂
Fc受体是指细胞表面能够与**球蛋白(IgG、IgA、IgM、IgE和IgD)结合的分子,存在于NK 细胞、肥大细胞、巨噬细胞、中性粒细胞的表面。FcR 能够与抗体的Fc段结合,在检测时产生假阳性
商品化的 Fc Block试剂:重组人 IgG,小鼠 CD16/CD32 抗体。
人血清或相应物种的血清
流式细胞术(FCM)工作流程中的所有步骤对获取可发表的高品质图像都至关重要。尤其是利用正确的抗体去识别抗原以及放大信号是实现*佳显示的关键。
抗体滴定方法
用同种细胞,相同细胞数量与反应体积,加入不同量的抗体计算阳性峰荧光强度及信噪比(S/N>3)。
1、滴定的浓度范围尽量大,至少5个左右。
2、弱表达或不分群的抗原不适合做滴定。
3、滴定实验条件要和实际实验条件一致,如反应温度、pH等。
区分死细胞的方法
死细胞的自发荧光水平很高,且容易摄取抗体导致非特异性结合,*终影响实验结果;还可能会释放DNA,DNA非常粘稠,会导致细胞成团,容易堵塞管路。
死细胞特性:细胞膜渗透性增强,失去膜完整性
DNA结合染料: PI, DAPI, 7-AAD, TO-PRO-3等DNA染料只会进入细胞膜受损的细胞,结合到细胞的DNA上,
蛋白结合染料:结合细胞表面或膜内的游离胺,活细胞弱阳,死细胞强阳。可以用在固定标本中的,区分样本固定细胞状态。
FC受体封闭试剂
Fc受体是指细胞表面能够与**球蛋白(IgG、IgA、IgM、IgE和IgD)结合的分子,存在于NK 细胞、肥大细胞、巨噬细胞、中性粒细胞的表面。FcR 能够与抗体的Fc段结合,在检测时产生假阳性
商品化的 Fc Block试剂:重组人 IgG,小鼠 CD16/CD32 抗体。
人血清或相应物种的血清