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完成蛋白质印迹检测，必须满足4个条件
日期：2024-09-24 21:48
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摘要：
**印迹（immunoblotting）又称蛋白质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相**测定技术基础上发展起来的一种新的**生化技术。由于**印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相**测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。**印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。结合化学发光检测，可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异。
成功完成Western Blot检测，必须满足4个条件：
1. 凝胶洗脱：转移期...
**印迹（immunoblotting）又称蛋白质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相**测定技术基础上发展起来的一种新的**生化技术。由于**印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相**测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。**印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。结合化学发光检测，可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异。
成功完成Western Blot检测，必须满足4个条件：
1. 凝胶洗脱：转移期间蛋白质必须从凝胶中洗脱出来，如果蛋白质还截留在凝胶中，将无法在膜上进行分析。
2. 处理期间仍截留在膜上：在转移后的处理过程中蛋白质必须保持吸附在印迹膜上。处理过程中可接近：被吸附的蛋白质必须能够与检测试剂接触，如果蛋白质被掩盖则无法检测。
3. 吸附到膜上：在转移过程中蛋白质必须吸附到膜上，如果蛋白不吸附，将无法在膜上进行分析。
4. 成功进行WB检测，则设置合适正确的对照是必不可少的，只要正确设置了这些对照，即可快速和准确的找到WB的问题所在，并保证实验结果的准确性和特异性！一般需要设置的对照如下：
阳性对照：明确表达检测蛋白的组织或细胞，用于检测抗体的工作效率。
阴性对照：明确不表达检测蛋白组织或细胞，用于检测抗体的特异性
二抗对照：不加一抗，用于检测二抗的特异性
内参对照：检测标本的质量和二抗系统
空白对照：不加一抗和二抗；用于检测膜的性质和封闭的效果