1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)**天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
以下是人葡萄膜黑色素细胞;UM图片产品信息的认购信息:
细胞名称 人葡萄膜黑色素细胞;UM图片
形态特性 多角
生长特性 贴壁生长
特征特性
培养条件 F12: Ham's F12 Nutrient Mixture 10%FBS;bFGF,霍乱素,异丁基甲基黄嘌呤IBMX4.4mg/200ml
传代方法 1:3传代;3~4天1次。
传代情况 P5
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR Amelogenin:X,Y;CSF1PO:10,12;D13S317:10,11;D16S539:9,11,12;D18S51:13,15,16;D19S433:13,16.2;D21S11:28,30,31.2;D2S1338:17,OL,19,22;D3S1358:15;D5S818:9,11;D7S820:10,11,12;D8S1179:10,12,14;FGA:24;TH01:9,9.3;TPOX:9,11;vWA:17,18;
同工酶
染色体
注意事项:
1. 人葡萄膜黑色素细胞;UM图片接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精(建议配置75%的酒精的水是过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。
细胞培养的优点:
1.人葡萄膜黑色素细胞;UM图片研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备
记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广,如细胞学、学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等;
适用的对象范围广,从低等动物到高等动物,一种动物的不同年龄阶段以及不同组织,都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。
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CHN1 / chimerin 1 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA 50 µg
TSPYL5 特异性Y蛋白样5抗体 0.2ml
E.coli O6 大肠杆菌埃希杆菌O6抗体(肠致病性大肠杆菌O6) 0.2ml
CEP76 中心体蛋白质76抗体 0.2ml
NOS-2/iNOS 合成酶-2抗体(诱导型) 0.1ml
HOXB8 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB IP 50 µg
phospho-SYN1(Ser549) 磷酸化神经突触素1抗体 0.1ml
XRCC1 X射线修复交叉互补蛋白抗体 0.1ml
Cystatin D 胱抑素D/半胱氨酸蛋白酶抑制剂D抗体 0.2ml
CCDC82 卷曲螺旋结构域蛋白82抗体 0.2ml
Phospho-EGFR (Tyr1138) 磷酸化表皮生长因子受体抗体 0.1ml
萘地尔 英文名称 含量测定 规格: 20mg/支进口/国产 含量: 100606-200301
磷钨酸水合物 进口、国产 英文名称: Phosphotungstic acid hydrate 含量: 指示剂
英文名称 规格: 20mg/支进口/国产 含量:
人葡萄膜黑色素细胞;UM图片甲硝唑杂质A(2-甲基-4(5)-硝基咪唑 检查 进口/国产 常温,避光 规格: 50mg
唑西林 英文名称 HPLC法含量测定 规格: 20mg/支进口/国产 含量: 0423-9902
葫芦巴碱 含量测定 进口/国产 常温,避光 规格: 20mg
腺苷 英文名称 对照品 规格: 20mg/支进口/国产 含量: 含量测定
甜茶 英文名称 TLC法鉴别 规格: 20mg/支进口/国产 含量: 121372-200502
焦儿茶醛二甲醚 进口、国产 英文名称: 3,4-二甲氧基苯甲醛3,4-Dimethoxybenzaldehyde 含量: AR,99.5%
176 乙菊酯 (10ug/ml 环已烷)标准品 CAS号: 10ml 英文名称 规格: 20mg/支进口/国产 含量:
L-β-巯基丙氨酸 进口、国产 英文名称: L-Cysteine 含量: BR,99%