1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)**天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
以下是小鼠网织细胞肉瘤;M5076图片产品信息的认购信息:
细胞名称 小鼠网织细胞肉瘤;M5076图片
形态特性 梭形
生长特性 半悬浮生长,贴壁细胞呈短梭形。
特征特性 该细胞来源于C57BL/6小鼠卵巢组织自发的网织细胞肉瘤,经细胞形态和功能鉴定后为巨噬细胞来源:该细胞具有吞噬活性;表达Fc受体,与绵羊红细胞形成玫瑰花环;对51Cr标记的红细胞具有抗体依赖的细胞毒反应;对同源小鼠肿瘤细胞(B16-F1)有巨噬细胞样的细胞毒作用,且不需要LPS的激活;没有NK细胞的活性;具有同小鼠腹腔巨噬细胞相当的溶菌酶、非特异性酯酶和磷酸酶的活性;超微结构显示该细胞内有吞噬小泡,缺乏紧密连接,这些特点都符合巨噬细胞的形态特征。核型分析显示该细胞为亚二倍体,因罗伯逊易位,>80%的染色体
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15% HS
传代方法 1:2~1:3传代,3~4天1次。
传代情况 C3
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR -
同工酶
染色体
注意事项:
1. 小鼠网织细胞肉瘤;M5076图片接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精(建议配置75%的酒精的水是过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。
细胞培养的优点:
1.小鼠网织细胞肉瘤;M5076图片研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备
记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广,如细胞学、学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等;
适用的对象范围广,从低等动物到高等动物,一种动物的不同年龄阶段以及不同组织,都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。
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Phospho-PKR (Thr446) 磷酸化蛋白激酶R抗体 规格: 0.1ml
AD7C-NTP(human) 神经丝蛋白抗体(人) 0.2ml
G6PDH/H6PD 己糖6磷酸脱酶抗体 规格: 0.2mlSMN1 运动神经元生存蛋白1 规格: 0.1ml
Insulin(1D4:) 猪胰岛素单克隆抗体 规格: 0.1ml
5HTR3B/5HT3B receptor 5-羟色胺受体3B抗体 0.1mlPhospho-TIF1 beta(Ser824) 磷酸化转录中介因子Tif1β抗体 规格: 0.1ml
Phospho-NDRG1 (Thr346) 磷酸化分化相关基因NDRG1抗体 规格: 0.1mlZO-1 胞质紧密粘连蛋白1抗体(闭锁小带蛋白1) 规格: 0.1ml
AANAT 芳香胺N-乙酰化转移酶抗体 0.2ml
Phospho-MDM2(Ser186) 磷酸化双微体2基因抗体 规格: 0.1ml
MMS2/EDPF1 肠细胞分化相关因子1抗体 规格: 0.2ml
Twist2 TWIST蛋白2抗体抗体 规格: 0.2ml
CD34 CD34抗体 规格: 0.1mlODF3B 外致密纤维蛋白3B抗体 规格: 0.2ml
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