1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)**天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
以下是小鼠骨髓瘤细胞;Fox-NY图片产品信息的认购信息:
细胞名称 小鼠骨髓瘤细胞;Fox-NY图片
形态特性 母细胞样
生长特性 悬浮生长
特征特性 该细胞来自骨髓瘤细胞系 NS-1;由于次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT、HGPRT)和腺嘌呤磷酸核糖转移酶(APRT)缺陷导致该细胞对腺苷和鸟嘌呤的类似物抵抗。在氨基蝶呤、腺嘌呤和胸腺嘧啶存在的条件下,当该细胞作为永生化细胞与Rb(8.12)易位的雌性小鼠的B细胞融合时,会产生Ig重链基因位点的阳性选择;Ig重链基因的选择可使杂交瘤细胞更稳定地合成抗体。该细胞鼠痘病毒阴性。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
传代方法 维持细胞浓度在2×105~1×106 cells/ml之间;2~3天换液1次。
传代情况 C5
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR -
同工酶
染色体 50~60
注意事项:
1. 小鼠骨髓瘤细胞;Fox-NY图片接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精(建议配置75%的酒精的水是过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。
细胞培养的优点:
1.小鼠骨髓瘤细胞;Fox-NY图片研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备
记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广,如细胞学、学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等;
适用的对象范围广,从低等动物到高等动物,一种动物的不同年龄阶段以及不同组织,都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。
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Synaptotagmin 1/SYT1 突触结合蛋白1抗体 0.2ml
NOX2/gp91phox NADPH氧化酶2抗体 规格: 0.1ml
DGCR2 DGCR2蛋白抗体 规格: 0.2mlRLBP1L1 视黄醛结合蛋白1抗体 规格: 0.2ml
ANKRD20A3 锚蛋白重复结构域蛋白20A3抗体 规格: 0.2ml
XRCC4 X射线修复交叉互补蛋白4抗体 规格: 0.2mlMAGEA12 黑色素瘤相关抗原12抗体 规格: 0.2ml
Nfasc186 神经束蛋白186抗体 规格: 0.2ml
ESYT1/FAM62A 延伸突触蛋白1抗体 规格: 0.2ml
KCTD5 钾离子通道四聚体结构域蛋白5抗体 规格: 0.2mlStanniocalcin 1 斯钙素抗体 规格: 0.1ml
MDGA2 神经元膜糖蛋白锚定蛋白2抗体 规格: 0.2mlKCNA5 钾电压阀门通道混合器相关亚家族成员5抗体 规格: 0.2ml
Os05g0477200 protein 水稻白叶枯病Os05g0477200蛋白抗体 规格: 1ml
FAM3A 胰衍生因子抗体 规格: 0.1ml
红松Pinus koraiensisMatairesinol罗汉松树脂酚580-72-3C20H22O6 ≥98%
苦参 Sophora flavescens Ait.Matrine苦参碱519-02-8C15H24ON2O ≥98%
长小鼠骨髓瘤细胞;Fox-NY图片苞冷杉Abies georgeiMearnsetinnone16805-10-0C16H12O8 ≥95%
假黄皮Clausena excavataMearnsitrin杨梅酮 4'-甲醚-3-O-鼠李糖苷30484-88-9C22H22O12 ≥95%
豆科植物紫苜蓿(Medicago sativea L.)Medicagenic acid苜蓿酸599-07-5C30H46O6 ≥98%
豆科植物紫苜蓿(Medicago sativea L.)Medicagol苜蓿内酯1983-72-8C16H8O6 ≥98%
闹鱼崖豆Millettia ichthyochtonaMedicarpin美迪紫檀素32383-76-9C16H14O4 ≥99%
山胡椒Lindera glaucaMegastigm-7-ene-3,4,6,9-tetrolnone180164-14-1C13H24O4 ≥95%
雷公藤Tripterygium wilfordiiMedioresinol梣皮树脂醇40957-99-1C21H24O7 ≥96%
骆驼蓬Peganum harmalaMegastigm-7-ene-3,5,6,9-tetraol巨豆-7-烯-3,5,6,9-四醇276870-26-9C13H24O4 ≥95%
苦楝Melia azedarachMeliasenin Bnone1221262-77-6C30H44O4 ≥95%