1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)**天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
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细胞名称 小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-C2图片
形态特性 克隆样
生长特性 贴壁生长
特征特性 裸鼠移植实验证明可向三个胚层分化。
培养条件 KO-DMEM + 15% FBS + 103U/ml LIF + 2mM L-Glu + 1% NEAA + 0.1M β-Mer
传代方法 1:10传代;3~4天传代一次
传代情况
冻存条件 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR -
同工酶
染色体
注意事项:
1. 小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-C2图片接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精(建议配置75%的酒精的水是过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。
细胞培养的优点:
1. 小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-C2图片研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备
记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广,如细胞学、学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等;
适用的对象范围广,从低等动物到高等动物,一种动物的不同年龄阶段以及不同组织,都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。
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Bcl-2 Bcl-2抗体 规格: 0.1mlCCL23/MIP3 巨噬细胞炎性蛋白抗体 规格: 0.1ml
IL-16/LCF 白介素-16抗体 规格: 0.1ml
phosphor-Caldesmon(Ser789) 磷酸化钙介质素抗体 规格: 0.1ml
Defensin β1 防御素β1抗体 规格: 0.1mlDC-SIGNR/CD299 CD299抗体 规格: 0.2ml
Klotho Klotho多肽蛋白抗体 规格: 0.1mlNck1/NCK alpha NCK衔接蛋白1抗体 规格: 0.2ml
CDK9/Cyclin T1 周期素依赖性激酶9抗体 规格: 0.1ml
Nucleoporin p62 核孔糖蛋白P62抗体 规格: 0.2mlPAPPA 娠相关浆蛋白A抗体 规格: 0.1ml
TECTB 遗传性耳聋β-tectorin抗体 规格: 0.2ml
Ankyrin G 锚定蛋白G抗体 规格: 0.2ml
GPX4 谷胱甘肽过氧化酶4抗体 规格: 0.2mlFMN2 形成素2抗体(成蛋白) 规格: 0.2ml
phospho-HDAC1(Ser423+Ser421) 磷酸化组蛋白去乙酰化酶1抗体 规格: 0.1ml
常绿苦树Picrasma javanicaPicrasin B黄苦木素 B,苦树素 B,苦楝苦素26121-56-2C21H28O6 ≥97.5%
常绿苦树Picrasma javanicaPicrasin B acetate黄苦木素B乙酸酯30315-04-9C23H30O7 ≥96%
苦木Picrasma quassioidesPicrasinol B苦树醇 B89498-91-9C22H32O6 ≥97%
夹竹桃科植物灯台树 A lstonia scholaris ( l . ) R. Bro. 的干燥叶片Picrinine鸭脚树叶碱4684-32-6C20H22N2O3 ≥98%
八角莲Dysosma versipellis(Hance.)Picropodophyllotoxin苦鬼臼17434-18-3C22H22O8 ≥98%
小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-C2图片胡黄连Picrorhiza scrophulariiflora PennellPicroside II胡黄连苷II39012-20-9C23H28O13 ≥98%
胡黄连Picrorhiza scrophulariiflora PennellPicroside III胡黄连苷Ⅲ64461-95-6C41H68O14 ≥98%
闹鱼崖豆Millettia ichthyochtonaPierreione B7-[4-[(2R)-2,3-二羟基-3-甲基丁氧基]- 3-甲氧基基]-2,2-二甲基-2H,6H-苯并[1,2-b:5,4-b']二吡喃-6-酮1292766-21-2C26H28O7 ≥98%
木防已属 CocculusPicrotoxin苦毒浆果124-87-8C30H34O13 ≥98%
云南松Pinus yunnanensisPimaric acid海松酸127-27-5C20H30O2 ≥95%
茴芹 Pimpinella saxifraga L.Pimpinellin茴芹内酯131-12-4C13H10O5 ≥98%