1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)**天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
以下是抗SARS病毒N蛋白小鼠杂交瘤细胞;S03图片产品信息的认购信息:
细胞名称 抗SARS病毒N蛋白小鼠杂交瘤细胞;S03图片
形态特性 母细胞样
生长特性 半贴壁生长
特征特性 可产生单克隆抗体,抗原为SARS病毒N蛋白。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
传代方法 保持细胞密度在1×105~1×106 cells/ml之间,每周换液2~3次
传代情况 不详
冻存条件 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR -
同工酶
染色体
注意事项:
1. 抗SARS病毒N蛋白小鼠杂交瘤细胞;S03图片接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精(建议配置75%的酒精的水是过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。
细胞培养的优点:
1.抗SARS病毒N蛋白小鼠杂交瘤细胞;S03图片研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备
记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广,如细胞学、学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等;
适用的对象范围广,从低等动物到高等动物,一种动物的不同年龄阶段以及不同组织,都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。
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SNX1/Sorting nexin1 分选连接蛋白1抗体 0.2ml
GRM5/mGluR5 促代谢型谷氨酸受体5抗体 规格: 0.1ml
CCDC36/CT74 瘤/睾抗原74抗体 规格: 0.2ml
C11orf21 11号染色体开放阅读框21抗体 规格: 0.2mlRabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的兔抗小鼠k链 规格: 0.1ml
ADAMTS15 整合素样金属蛋白酶与凝酶15型抗体 规格: 0.2ml
APP/ABPP 淀粉样肽前体蛋白抗体 规格: 0.1ml
Robo4 瘤管内皮调节蛋白Robo4抗体 规格: 0.2mlClostridium perfringens type D D型产气荚膜梭抗体 规格: 1ml
SLURP1/ANUP 抗瘤蛋白ANUP抗体 规格: 0.2ml
mu Opioid receptor µ-型片受体抗体 规格: 0.1mlADAM10/MADM/CD156c 去整合素样金属蛋白酶10抗体 0.2ml
IFNA21/IFNA F 干扰素α21抗体 规格: 0.2ml
MAGE-1 黑色素瘤相关抗原抗体 规格: 0.1mlphospho-MEF2C(Thr300) 磷酸化肌细胞增强因子2C抗体 规格: 0.1ml
黄连 Coptis chinensis Franch.Worenine甲基黄连碱38763-29-0C20H17NO5 ≥98%
莽吉柿Garcinia mangostanaBR-Xanthone Anone112649-48-6C23H24O6 ≥95%
南山花Prismatomeris tetrandraXanthatin叶黄制素26791-73-1C15H18O3 ≥98.5%
抗SARS病毒N蛋白小鼠杂交瘤细胞;S03图片菊科植物苍耳Xanthium sibiricum 干燥成熟带总苞的果实Xanthiazone噻嗪二酮212701-97-8C11H13NO3S ≥98%
苍耳Xanthium sibiricumXanthinin黄质宁153483-31-9C17H22O5 ≥97%
菊科植物苍耳Xanthium sibiricum 干燥成熟带总苞的果实Xanthiside噻嗪二酮苷866366-86-1C17H23NO8S ≥98%
啤酒花 Humulus lupulusXanthohumo黄腐酚6754-58-1C21H22O5 ≥98%
花椒Zanthoxylum bungeanumXanthotol花椒毒酚2009-24-7C11H6O4 ≥98%
木防己Cocculus orbiculatusXanthoplanine竹叶椒碱6872-88-4C21H26NO4 ≥95%
白亮独活Heracleum candicansXanthotoxol花椒毒醇2009-24-7C11H6O4 ≥96%
黄独Dioscorea bulbiferaXanthoxylin4',6-二甲基-2-羟基苯乙酮90-24-4C10H12O4 ≥99%